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一、假陰性（無擴增產物）
現象：正對照有條帶，樣品無條帶
可能原因：
· 模板：含有 Taq 酶抑制劑、雜蛋白，模板上樣量低或模板降解
· 引物：引物降解，引物設計不合理
· 試劑：酶失活，buffer 不合適
· 反應條件：退火溫度高，延伸時間短
解決方法：
· 純化模板并重新提取，并檢測模板是否含有抑制劑
· 重新設計引物并低溫保存
· 優化 buffer，摸索鎂離子濃度或適當加入 DMSO（小于 0.3%）
· 提高退火溫度，增加延伸時間（反應條件參照試劑盒說明書）
二、假陽性
現象：空白對照出現條帶
可能原因：
· 引物設計不適，與目的序列具有同源性
· 試劑污染：水、移液槍等被核酸污染
· 樣品間出現交叉污染
解決方法：
· 實驗儀器高壓滅菌
· 實驗試劑（酶除外）高壓滅菌，離心管槍頭一次性使用
· 規范實驗操作
· 假陽性可通過巢式 PCR 解決，或者使用特異性較高的試劑盒擴增
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