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決定PCR反應(yīng)特異性主要因素

2025-4-7  閱讀(126)

  PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。
 
  PCR反應(yīng)特異性主要決定因素:
 
  1、引物。引物的結(jié)構(gòu)和長度是PCR特異性的關(guān)鍵。此外,引物濃度過高會增大形成引物二聚體的概率,從而降低PCR特異性。
 
  2、復(fù)性溫度。在Tm值允許范圍內(nèi),選擇較高的復(fù)性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結(jié)合,提高PCR反應(yīng)的特異性。
 
  3、延伸時間。延伸時間過長會導(dǎo)致非特異性擴增帶的出現(xiàn)。
 
  4、Mg2+濃度。Mg2+濃度對PCR擴增的特異性有顯著影響。Mg2+濃度過高時,容易出現(xiàn)非特異性擴增,使反應(yīng)特異性降低。
 
  5、DNA聚合酶的種類和數(shù)量。不同種類的酶對PCR特異性的影響程度不同;酶的量過多更容易引起非特異性擴增。
 


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