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上海滬宇生物科技有限公司作者
基本原理
Na251CrO4能進入到增殖的細胞內，與細胞漿蛋白質牢固地結合。當標記的51Cr細胞受到損傷或死亡之后，即可釋放出51Cr。51Cr輻射γ射線，通過測定受損傷或死亡靶細胞釋放到上清中的51Cr，即可計算出NK細胞活性。
試劑及材料
1. 鉻酸鈉（Na251CrO4）：51Cr的物理半壽期為27.72d。
2. 十二烷基硫酸鈉（SDS）：用無菌生理鹽水配制成2%濃度。
3. 靶細胞：檢測人的NK細胞活性常用的靶細胞為體外傳代細胞株K562。檢測小鼠NK細胞活性常用的靶細胞是YAC-1細胞株。實驗時一般采用24～48h培養的靶細胞。
4. 效應細胞：從人外周血（肝素抗凝）分離的單個核細胞或小鼠脾細胞。
5. 含15%NCS的RPMI-1640營養液及淋巴細胞分層液等。
操作方法
1. 靶細胞的制備：取培養24～48h的靶細胞2×106/0.5ml，加入100～200μci51Cr，置37℃水浴90min，每間隔15min振搖一次。然后用含5%NCS的RPMI-1640培養液洗滌三次，除去游離的51Cr。計數活細胞，用*RPMI-1640培養液調整細胞濃度至1×105/ml，如暫時不用，可放置4℃冰箱內保存。同時應檢測細胞的51Cr標記率，一般要求標記率>0.1cpm/細胞；
2. 效應細胞的制備：常規方法分離PBMC或小鼠脾細胞，用*RPMI-1640培養液配制成1×107/ml的細胞懸液備用；
3. 效―靶細胞作用：在無菌操作條件下，取效應細胞和靶細胞各0.1ml（E/T=100:1），加入96孔培養板內，每份標本做3復孔。同時設自然釋放對照孔（0.1ml靶細胞+0.1ml*RPMI-1640培養液）和zui大釋放孔（0.1ml 靶細胞+0.1ml 2%SDS），放置37℃、5%CO2溫箱內孵育4h，取出后用微量移液器吸出各孔上清0.1ml，加于小塑料試管內（勿將細胞吸出），用γ計數儀測量cpm值；
4. 結果計算:根據下式計算51Cr自然釋放率和NK細胞活性:
自然釋放對照孔cpm均值
zui大釋放對照孔cpm均值
試驗孔cpm均值-自然釋放對照孔cpm均值
zui大釋放對照孔cpm均值
注：一般要求51Cr自然釋放率<10％
關鍵詞：移液器
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