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Feulgen反應實驗步驟

2012年04月13日 06:57:38人氣:2750來源:上海滬宇生物科技有限公司

標本需經固定后方可染色,Carnoy固定液可按無水乙醇:三 氯 甲烷:冰 醋 酸為6:3:1比例配制。固定后石蠟切片即可。盡量不用新鮮組織恒冷箱切片,因胞質中存在的縮醛 磷脂會出現非特異染色。若必須使用恒冷箱切片,需做切片后固定。用已固定的組織石蠟切片可消除縮醛 磷 脂。減少非特異染色,具體操作如下:

1.切片脫蠟入水;
2.用lmol/L H Cl浸洗;
3.切片放人預熱到60℃1mol/LH Ci內6分鐘,(固定的標本為10~15分鐘.Susa固定的標本為18分鐘,水解時間因固定液不同而有差異);
4.入室溫lmol/LH  Cl洗;
5.蒸餾水洗;
6.人Schiff液,于室溫暗處(或外包黑紙)30~60分鐘;
7.人亞硫 酸 鈉水溶液漂洗3次,每次1~2分鐘;
亞硫 酸 鈉水溶液配法:
10%NaHS03 5ml
1mol/L HCl 5ml
加蒸餾水至 100ml
8.蒸餾水洗;
9.脫水、透明、封固。
結果:細胞核內DNA染成紫紅色
對照實驗:
雖然Feulgen法是DNA 的特異染色方法,但如果延長水解時間并在室溫下進行反應, Schiff試劑也與醛、酮、醇和縮醛磷脂起反應,因此用Feulgen法檢測DNA時必須嚴格控制鹽酸水解的時間和溫度。為減少假陽性和非特異性染色必須做對照實驗。可按上述步驟做平行對照實驗,僅將第3步,即60℃ lmol/LHCl水解改為室溫15分鐘,其余與上述步驟相同,結果DNA應為Feulgen陰性反應。
Feulgen反應圖
大鼠腎小體和腎小管細胞核呈nigert陽性反應,含紫紅色反應產物
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