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1. 種屬來源要匹配:根據所用一抗選定二抗。一般來說,如果一抗是小鼠原性,二抗應選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前,美國Vector公司和Zymed公司都有開發的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒,即一抗來源于小鼠,該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內源性小鼠Ig的封閉液,可以得到清晰的染色背景。
2. 注意抗體同種型和亞型:確定一抗同種型和亞型后,可以選擇抗一抗來源種屬廣譜Ig或針對一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠IgG1, 可以選用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。
3. 正確使用:也需要重新選擇稀釋比例。一般從供應商提供稀釋比例的1/10稀釋度始,作5倍比稀釋。
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