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DNA的轉化實驗原理

時間:2013-12-31閱讀:393
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DNA的轉化實驗原理: 
    體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒,選用轉化和篩選技術,可獲得含重組的陽性克隆.在此陽性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴增,繁殖,保存以及表達目的基因的產物,這是PCR體外擴增DNA所不能替代的.配合DNA重組技術,所獲得的,不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研,醫藥生產和生物發酵等領域. 
    質粒轉化不同細菌有不同的轉化效率,轉化效率的高低與實驗的成敗直接相關, 通常轉化效率可達105-107轉化子/μg DNA.獲得高轉化效率的關鍵是感受態體菌的制備.感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態,只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子. pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時,LacZ基因失活,轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和X-gal培養基生長時,會產生白色的克隆,不含插入片段的pUC18質粒進入宿主細胞生成藍色菌落. 

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