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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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怎樣才能讓大鼠elisa試劑盒系統(tǒng)更加穩(wěn)定
2017-9-4 閱讀(193)
大鼠elisa試劑盒檢測(cè)系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研中zui為靈敏的技術(shù)手段。可是在新老手操作過(guò)程中總是會(huì)出現(xiàn)或大或小的問(wèn)題，很多人在剛開(kāi)始做ELISA時(shí)就面臨很多困難，雖然有前任鋪路，但還是常常做得一塌糊涂，比如說(shuō)花板，假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低,科研人員也為此苦惱過(guò)很長(zhǎng)一段時(shí)間，隨著自己技術(shù)水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是輕車(chē)熟路了，以前檢測(cè)一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現(xiàn)在給十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定。下面就由上海紀(jì)寧拋磚引玉地來(lái)說(shuō)一下，做ELISA的經(jīng)驗(yàn)總結(jié):
1、ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，我把方法簡(jiǎn)要的列出如下:①親和素:先親和素先包被載體，加入化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。②脂類(lèi)物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開(kāi)蓋置冰箱guo ye或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
3、大鼠elisa試劑盒封閉：繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐。
Human IL-3 兔單抗 ELISA IL3 MAb
Human alpha-Galactosidase A / GLA 兔單抗 WB ELISA GLA MAb
Human FOLR2 兔單抗 ELISA FOLR2 MAb
Human DPP10 兔單抗 ELISA DPP10 MAb
Human Fractalkine / CX3CL1 兔單抗 ELISA CX3CL1 MAb
Human Cystatin S / CST4 兔單抗 ELISA CST4 MAb
Human Cystatin SA / CST2 兔單抗 ELISA CST2 MAb
Human CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 兔單抗 ELISA CSF2RB MAb
Human Complement Factor H / CFH 兔單抗 ELISA CFH MAb
大鼠elisa試劑盒
