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搖瓶培養(yǎng)的篩選

時間:2016/1/20閱讀:2795
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.搖瓶培養(yǎng)

    篩選的全過程都要通過搖瓶培養(yǎng)。搖瓶培養(yǎng)是通過搖床振蕩,使菌體與培養(yǎng)基和空氣充分接觸而獲得營養(yǎng)和氧氣。搖瓶培養(yǎng)的優(yōu)點是培養(yǎng)條件與發(fā)酵罐接近,這樣選育出來的菌株容易推廣到大中去。ELISA試劑盒

    搖瓶培養(yǎng)通常可分為初篩和復(fù)篩。初篩由于菌株較多,常一個菌株接一個搖瓶,進行振蕩培養(yǎng),培養(yǎng)結(jié)束后逐個進行活性測定,將能力高的菌株用砂土管或冷凍管保藏。待初篩結(jié)束后,再將砂土管或冷凍管菌種接人斜面,進一步進行搖瓶復(fù)篩.此時一個菌株要接3~5個搖瓶,以提高性。

    選育高產(chǎn)菌種的zui終目的是要應(yīng)用到上去,因此,搖瓶的培養(yǎng)條件要盡量與發(fā)酵罐接近。

    搖瓶篩選實際上是各菌株之間的對比試驗,因此,有關(guān)搖瓶培養(yǎng)的各種條件要力求一致,如搖瓶型號、裝量、瓶塞厚度或瓶El包扎紗布的層數(shù)、搖床轉(zhuǎn)速、溫度等。

2.產(chǎn)物活性測定

    產(chǎn)物活性測定是菌種篩選的重要組成部分,也是決定篩選數(shù)量的主要因素之一。一般來說,初篩的菌株數(shù)越多,就越有可能篩選到優(yōu)良菌株。因此擴大篩選量是提高育種效率的一個重要方面,在篩選工作中建立一個簡便、快速而又較準確的檢測方法也就顯得十分重要了。下面介紹幾種在搖瓶初篩中常用的快速測定代謝產(chǎn)物的方法。

()瓊脂平板孔洞法 以代謝產(chǎn)物為酶類的突變株的篩選為例。將一定量的底物和瓊脂做成厚約3mm的平板,待凝固后,用直徑5mm的打孔器取出瓊脂塊,使平板上留下50~60個圓孔。然而加入過濾或離心后的發(fā)酵液IOF.L,置于底物作用的溫度下,培育20~25h,在孔洞周圍出現(xiàn)水解圈。根據(jù)水解圈的大小和清晰度決定取舍。ELISA試劑盒

(2)紙片法取直徑為0.5cm的圓形濾紙片,滅菌后覆蓋于含有底物或檢定菌的瓊脂板上,吸取~2pL發(fā)酵液于濾紙上,置一定溫度下培養(yǎng)一定時間,測定水解圈或抑菌圈的大小。

(3)瓊脂薄層紙片法瓊脂薄層紙片法適合于抗真菌抗生素和農(nóng)用抗生素產(chǎn)生菌的初篩,是一種與生物相關(guān)性較強的初篩方法。它是一種符合大量菌株和以多種產(chǎn)孢子的真菌、病原菌為對象的綜合篩選方法。

    制備病原菌的孢子懸液,加入到45~50℃的真菌培養(yǎng)基中,混勻,傾人到玻璃板上,均勻攤平,制成約cm厚的薄層瓊脂板。將圓形濾紙片覆于薄層瓊脂上,加入~2μL發(fā)酵液,編號。在玻璃板兩端各放上一塊條狀的玻璃作為墊子,上面蓋一塊滅菌過的玻璃板。放入搪瓷盤內(nèi),置適宜的溫度下培養(yǎng)。置于解剖鏡或立體顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)、菌絲形態(tài),并測量抑菌圈大小。

3.搖瓶數(shù)據(jù)的調(diào)整和有關(guān)菌株特性的觀察分析

    搖瓶試驗的測定數(shù)據(jù)是否準確直接關(guān)系到高產(chǎn)菌株的篩選頻率。搖瓶試驗的誤差來自兩個方面:一是搖瓶條件的不一致;二是檢測過程的誤差。對搖瓶發(fā)酵液的測試數(shù)據(jù)要盡量用生物統(tǒng)計方法來處理,以便在復(fù)雜的數(shù)據(jù)中去偽存真,抓住本質(zhì)。在分離、篩選和整個試驗過程中,每個階段都要周密地觀察菌株特性。ELISA試劑盒

4.培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化

    高產(chǎn)表型是由基因型和環(huán)境相互作用共同決定的,通過誘變育種得到的高產(chǎn)菌株具有高產(chǎn)基因型,但出發(fā)菌株的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件對高產(chǎn)菌株來說并非。因此,高產(chǎn)菌株選育之后,需對高產(chǎn)菌株的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化,以充分發(fā)揮高產(chǎn)菌株的高產(chǎn)潛力。可用單因子法、正交試驗法、均勻設(shè)計、響應(yīng)面法等方法進行培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化。

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