88国产精品视频一区二区三区,久久精品AⅤ无码中文字字幕重口,久久偷看各类WC女厕嘘嘘,好男人资源在线看免费的

上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

15026555973

elisa試劑盒
E2定量elisa 試劑盒 雌二醇elisa 試劑盒 胃泌素17ELISA試劑盒 S-100B Elisa試劑盒 IL-22 Elisa試劑盒 Hcy Elisa試劑盒 TSZ Elisa試劑盒 Toll樣受體4Elisa試劑盒 IL-12/P40 ELISA 試劑盒 腎損傷分子1Elisa試劑盒 補(bǔ)體片斷5aElisa試劑盒 花生四烯酸Elisa試劑盒 Elisa試劑盒 黑色素細(xì)胞抗體檢測(cè)試劑盒 白介素2Elisa試劑盒 pAMPK Elisa Kit GFAP Elisa Kit SDC1 ELISA Kit CXC趨化因子受體5Elisa試劑盒 γ干擾素受體Elisa試劑盒 抗血小板抗體IgAElisa試劑盒 α1微球蛋白/bikunin前體Elisa試劑盒 AQP-1 Elisa 試劑盒 STX1A elisa Kit VB12 Elisa Kit α1-AGP 試劑盒 HGF elisa 試劑盒 GP-73 elisa Kit 大鼠elisa免疫組化試劑盒 其他elisa免疫組化試劑盒 馬elisa免疫組化試劑盒 貓elisa免疫組化試劑盒 綿羊elisa免疫組化試劑盒 牛elisa免疫組化試劑盒 犬elisa免疫組化試劑盒 人elisa免疫組化試劑盒 山羊elisa免疫組化試劑盒 兔ELSIA試劑盒 豚鼠elisa免疫組化試劑盒 小鼠elisa免疫組化試劑盒 豬elisa試劑盒
細(xì)胞
培養(yǎng)基
生化試劑
酶聯(lián)免疫elisa試劑盒
NF-KB檢測(cè)試劑盒
原代細(xì)胞
PCR試劑盒
RNA/DNA提取
血清
ATCC細(xì)胞
質(zhì)粒
細(xì)胞系

大鼠骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)方法

時(shí)間:2016/1/18閱讀:1674
分享:

(一)原代培養(yǎng)法

.將新生大鼠用頸椎脫位法處死,去除足趾及尾巴。70%酒精消毒后固定于解剖板上。

2.去除后腿皮膚,用血管鉗分離并剪切大腿肌肉。用含抗生素(00IU/ml、00μg/ml)的PBS沖洗2次。

3.將肌肉組織放人裝有用D—Hanks液配制的0.25%的溶液瓶中。瓶中預(yù)先放人一個(gè)磁棒,37℃(或室溫)磁力攪拌器上消化多次,每次0min。

4.利用沉淀法收集上清液中懸浮的細(xì)胞,未消化部分可繼續(xù)用同樣方法消化。

5.向細(xì)胞懸液中加入終濃度為0%的馬血清,終止消化作用。2500~3000r/min離心3~5min,用少量的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,鋼網(wǎng)過濾細(xì)胞懸液。

6.計(jì)數(shù)懸液細(xì)胞數(shù)。調(diào)制細(xì)胞濃度為 X 06/ml。

7.接種細(xì)胞時(shí),按60mm培養(yǎng)皿接種2~3×06細(xì)胞數(shù)為宜。37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

(二)骨骼肌細(xì)胞純化

    骨骼肌細(xì)胞的貼壁速度比非肌源性細(xì)胞慢,為此,可以用差速貼壁法獲得較高純度的肌源性細(xì)胞。具體方法是:

.取原代培養(yǎng)早期的細(xì)胞(培養(yǎng)30~40h),經(jīng)洗滌后,用0.25%的溶液消化。細(xì)胞開始脫壁時(shí)以馬血清終止消化。

2.收集脫壁的細(xì)胞,洗滌后用培養(yǎng)液制備成細(xì)胞懸液。

3.立即接種到另一培養(yǎng)板上,貼壁40min。此時(shí),多數(shù)非肌源性細(xì)胞已經(jīng)貼壁,而骨骼肌細(xì)胞仍懸浮在培養(yǎng)液中,或沉降到培養(yǎng)板上但未貼壁。

4.吸出未貼壁細(xì)胞,計(jì)數(shù)后將細(xì)胞調(diào)至所需細(xì)胞濃度,進(jìn)行接種。

5.接種后,骨骼肌細(xì)胞純度可達(dá)到90%以上。該方法亦可用于直接經(jīng)溶液消化的肌肉組織細(xì)胞。

(三)骨骼肌細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)

.明膠處理培養(yǎng)皿,將明膠覆蓋于培養(yǎng)皿一層即可。

2.制備飼養(yǎng)細(xì)胞將飼養(yǎng)細(xì)胞(可為鼠傳代細(xì)胞,或其他細(xì)胞)經(jīng)60GyX線照射后,以0.5~l×05個(gè)/皿鋪于培養(yǎng)皿。

3.將原代或傳代培養(yǎng)的骨骼肌細(xì)胞計(jì)數(shù)并進(jìn)行有限稀釋,每培養(yǎng)皿接種25~00個(gè)細(xì)胞。在適宜的條件下,細(xì)胞增殖一代的時(shí)間為~3h。一般在培養(yǎng)3~6d開始形成克隆。在無飼養(yǎng)層細(xì)胞時(shí)亦可形成克隆,但易受培養(yǎng)條件影響而降低克隆形成率。

4.單一克隆分離及傳代,先以蠟筆標(biāo)記出顯微鏡下觀察到的克隆,吸去培養(yǎng)液,以克隆環(huán)套住克隆并以硅脂封閉。向環(huán)中加l滴0.25%溶液。數(shù)分鐘后吸出細(xì)胞懸液,接種到新的培養(yǎng)板上。從原代培養(yǎng)的細(xì)胞獲得的克隆通常可傳~2代,但肌源性細(xì)胞株則易于進(jìn)行連續(xù)傳代,可克隆多次。

三、結(jié)果觀察

    在接種后數(shù)小時(shí),多數(shù)細(xì)胞即可貼附至培養(yǎng)瓶(皿)。培養(yǎng)瓶中主要應(yīng)為單個(gè)核的肌細(xì)胞.梭形、折光性較強(qiáng)可與非肌源性細(xì)胞相鑒別。接種培養(yǎng)約50h后,可見明顯細(xì)胞融合,并能形成纖維網(wǎng)。數(shù)天后細(xì)胞融合停止。融合后ld可見肌纖維的自發(fā)性收縮,l~2d后骨骼肌細(xì)胞的特征性橫紋變得明顯。利用放射自顯影、細(xì)胞化學(xué)及生物化學(xué)等方法可分析與融合有關(guān)的細(xì)胞合成活動(dòng)的變化。

四、冷凍保存

    骨骼肌細(xì)胞也可以用冷凍保存的方式保種。

.將肌細(xì)胞消化后配成約06個(gè)/ml的細(xì)胞懸液,用含20%馬血清,2%DMSO的細(xì)胞培養(yǎng)液配制,每個(gè)2ml的凍存管中加入lml細(xì)胞懸液,做好標(biāo)記。

2.先將凍存管置于4℃數(shù)小時(shí),放于一20℃數(shù)小時(shí)。放在經(jīng)4℃預(yù)冷的壁厚lcm以上的泡沫塑料盒內(nèi),置于80℃低溫冰箱中,使凍存管達(dá)到緩慢制冷的效果。l~2d后.可將凍存管放人液氮中保存。

3.解凍時(shí),將凍存管從液氮罐中取出,立即放人37℃水浴中迅速解凍。臺(tái)式離心機(jī)離心500 r/min。然后吸去上清液,以新鮮培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞沉淀,接種培養(yǎng)于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中。也可不離心,直接將細(xì)胞懸液接種至培養(yǎng)瓶中,加培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁后可按常復(fù)方法換液。

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言