臍帶間充質干細胞(UC-MSCs)是一類來源于發育早期中胚層的多能干細胞,與其他來源的MSCs相比,來源于臍帶的MSCs具有采集方便、無倫理爭議、免疫原性低、自我更新快、倍增速度穩定和增殖能力強等特點。此外,來源于臍帶的MSCs的外泌體攜帶多種傷口愈合的相關因子,能夠促進成纖維細胞的遷移、增殖和膠原合成,因此臍帶MSCs外泌體被認為是臨床細胞治療和再生醫學的shouxuan
該產品由臍帶間充質干細胞培養獲得的上清液分離純化得到的外泌體,可用于實驗對照、直接進行負載和靶向改造、組織修復等研究。
產品性質
名稱 | 臍帶間充質干細胞外泌體 |
規格 | 1E+11 Particles/ml |
外觀 | 白色粉末 |
pH | 7 |
無菌檢測 | 無菌生長 |
總蛋白濃度 | (BCA) |
純度 | ≥90% |
儲存條件:-80 ℃,1年
1:NTA檢測外泌體的粒徑分布和顆粒濃度:
將得到的外泌體震蕩分散均勻,用PBS稀釋至合適倍數,標記好樣本名稱、稀釋倍數、完成樣本的稀釋配制;測樣之前,先測試稀釋液:移液槍吸取200 μL稀釋液上機檢測,確認組件、儀器都處于正常運行;稀釋液測量完成,測試結果正常后開始測試樣本,取稀釋后的200 μL樣本上機檢測;待計數顆粒數達到100個以上時停止測試,導出數據結果,完成樣本檢測。
2:TEM觀察外泌體的形態:
重懸外泌體至50-100 μL 2% PFA中,將5 μL混合懸液加到Formvar-carbon載樣銅網上;也可將5-10 μL混合懸液滴加到封口膜上,將銅網Formvar膜面朝下放在懸液上。每個樣品準備2-3個銅網;將100 μL PBS加到封口膜上。用鑷子將銅網 (Formvar膜面朝下) 放在PBS液滴上清洗(在所有步驟中,都應保持Formvar膜面濕潤,而另一面干燥);將銅網放在50 μL 1%戊二醛液滴上5 min;將銅網放在100 μL ddH2O洗滌8次,每次洗2 min;將銅網放在50 μL草酸雙氧鈾液滴上(pH 7.0),5 min;將銅網放在50甲基纖維素液滴上10 min,冰上操作;銅網放到樣品臺頂端的不銹鋼環上,用濾紙吸去多余液體;空氣中干燥5-10 min;將銅網放在樣品盒內,80 kV下拍攝電鏡照片。
3:Western Blot檢測外泌體標志物(三陽一陰):
將分離純化得到的外泌體加入裂解液,裂解后吸取上清液,根據測定蛋白濃度稀釋樣本至合適濃度;裂解液加入4×LDS上樣緩沖液(B0007,Invitrogen),95 ℃煮5 min,待降至室溫后,瞬離;加樣:將15 μL樣本全部加到泳道中,并在樣本首尾加上marker;電泳:190 V,70 min;提qian10 min用甲醇活化PVDF膜;轉膜:轉膜液需要提前預冷,275 mA,70 min;封閉:配置1% BSA的TBST溶液,室溫封閉1 h;孵育一抗:4 ℃,搖床上過夜,抗體用1% BSA的TBST溶液稀釋;洗膜:1×TBST洗三次,10 min/次;孵育二抗:抗體用1% BSA的TBST溶液稀釋,室溫搖床1 h;洗膜:1×TBST洗三次,10 min/次;曝光拍照。
注意事項
本品僅限于專業人員的科學研究使用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。