脂肪間充質干細胞(ADSCs)是一類源自脂肪組織的多能干細胞,具有自我更新和多向分化潛能。它們可以分化為多種細胞類型,包括脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞、心肌細胞、神經細胞等。ADSCs還具有低免疫原性、可塑性強、旁分泌多種生物活性因子等特性,使其在臨床應用中具有廣闊的前景。脂肪間充質干細胞外泌體(Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells Exosomes, ADSCs-Exos)是近年來再生醫學和組織修復領域的研究熱點。ADSCs凋亡過程中釋放的細胞外囊泡(ApoEVs)在皮膚損傷修復中表現出色。該產品由脂肪間充質干細胞培養獲得的上清液,經分離純化得到的外泌體,可用于實驗對照、直接進行負載和靶向改造、組織修復等研究。
產品性質
名稱 | 脂肪間充質干細胞外泌體 |
規格 | 1E+11 Particles/ml |
外觀 | 白色粉末 |
pH | 7 |
無菌檢測 | 無菌生長 |
總蛋白濃度 | (BCA) |
純度 | ≥90% |
儲存條件:-80 ℃,1年
1:NTA檢測外泌體的粒徑分布和顆粒濃度:
將得到的外泌體震蕩分散均勻,用PBS稀釋至合適倍數,標記好樣本名稱、稀釋倍數、完成樣本的稀釋配制;測樣之前,先測試稀釋液:移液槍吸取200 μL稀釋液上機檢測,確認組件、儀器都處于正常運行;稀釋液測量完成,測試結果正常后開始測試樣本,取稀釋后的200 μL樣本上機檢測;待計數顆粒數達到100個以上時停止測試,導出數據結果,完成樣本檢測。
2:TEM觀察外泌體的形態:
重懸外泌體至50-100 μL 2% PFA中,將5 μL混合懸液加到Formvar-carbon載樣銅網上;也可將5-10 μL混合懸液滴加到封口膜上,將銅網Formvar膜面朝下放在懸液上。每個樣品準備2-3個銅網;將100 μL PBS加到封口膜上。用鑷子將銅網 (Formvar膜面朝下) 放在PBS液滴上清洗(在所有步驟中,都應保持Formvar膜面濕潤,而另一面干燥);將銅網放在50 μL 1%戊二醛液滴上5 min;將銅網放在100 μL ddH2O洗滌8次,每次洗2 min;將銅網放在50 μL草酸雙氧鈾液滴上(pH 7.0),5 min;將銅網放在50甲基纖維素液滴上10 min,冰上操作;銅網放到樣品臺頂端的不銹鋼環上,用濾紙吸去多余液體;空氣中干燥5-10 min;將銅網放在樣品盒內,80 kV下拍攝電鏡照片。
3:Western Blot檢測外泌體標志物(三陽一陰):
將分離純化得到的外泌體加入裂解液裂解后吸取上清液,根據測定蛋白濃度稀釋樣本至合適濃度;裂解液加入4×LDS上樣緩沖液(B0007,Invitrogen),95 ℃煮5 min,待降至室溫后,瞬離;加樣:將15 μL樣本全部加到泳道中,并在樣本首尾加上marker;電泳:190 V,70 min;提qian10 min用甲醇活化PVDF膜;轉膜:轉膜液需要提前預冷,275 mA,70 min;封閉:配置1% BSA的TBST溶液,室溫封閉1 h;孵育一抗:4 ℃,搖床上過夜,抗體用1% BSA的TBST溶液稀釋;洗膜:1×TBST洗三次,10 min/次;孵育二抗:抗體用1% BSA的TBST溶液稀釋,室溫搖床1 h;洗膜:1×TBST洗三次,10 min/次;曝光拍照。
注意事項
本品僅限于專業人員的科學研究使用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。