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小鼠胰島瘤細胞 (MIN6)

2016年11月02日 21:14:13人氣:1462來源:上海澤葉生物科技有限公司

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關 鍵 詞小鼠胰島瘤細胞說明書,小鼠胰島瘤細胞傳代,MIN6細胞傳代,MIN6細胞凍存,MIN6細胞*培養(yǎng)基
【資料簡介】

小鼠胰島瘤細胞

MIN6

 

細胞特性

1) 來源:小鼠胰島瘤

2) 含量:>1x106 個/mL

3) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:1干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇;2存活細胞收到后應繼續(xù)生長傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途:僅供科研使用。

細胞培養(yǎng)步驟

一. 培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備1640培養(yǎng)基;澳洲胎牛血清,10%雙抗1%;添加50uMβ-巰基乙醇。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%血清10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲存。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養(yǎng)

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 加1ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml*培養(yǎng)基終止消化

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存

下面T25瓶為例;

      1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml*,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

      2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

上海澤葉生物科技有限公司作者

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