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牛免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒說明書
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關 鍵 詞 | 牛免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒 |
- 【資料簡介】
牛免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒僅供研究使用
目的:本試劑盒用于測定牛血清,血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白 G(IgG)的含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛免疫球蛋白 G(IgG)水平。用純化的 IgG 抗體包被
微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 G(IgG),再與 HRP 標記
的 IgG 抗體結合, 形成抗體-抗原-酶標抗體復合物, 經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB
在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中
的免疫球蛋白 G 呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值) ,通過標準曲線
計算樣品中牛免疫球蛋白 G(IgG)濃度。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分) 。仔細收集上
清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心
20 分鐘左右(2000-3000 轉/分) 。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分) 。仔細收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/
分) 。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞
濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分
鐘左右(2000-3000 轉/分) 。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
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5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備
用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4) ,用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分) 。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性詳細說明書見附件!
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