牛白細(xì)胞介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

【資料簡介】

牛白細(xì)胞介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
0.5ng/L - 17ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素 6（IL-6）含量。
牛白細(xì)胞介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛白細(xì)胞介素 6（IL-6）水平。用純化的牛白細(xì)
胞介素 6（IL-6）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介
素 6（IL-6），再與 HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素  6（IL-6）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)
合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素 6（IL-6）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)
儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中牛白細(xì)胞介素   6（IL-6）
濃度。
試劑盒組成
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
牛白細(xì)胞介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書操作步驟
1.
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)