肝臟細(xì)胞RNA的提取

【資料簡介】

一．原理

RNA提取技術(shù)不僅是分子生物學(xué)技術(shù)的重要組成部分，也是功能基因組學(xué)科研技術(shù)的重要基礎(chǔ)。從RNA水平研究生物體內(nèi)基因的調(diào)控機制，已成為分子生物學(xué)研究的一個重要手段。對某一生物或組織進(jìn)行性狀研究，首先要獲得該性狀基因，從組織細(xì)胞中分離完整的RNA對于分子克隆和基因表達(dá)分析等實驗是至關(guān)重要的，如Northern印跡及雜交分析、cDNA合成等實驗的成效在很大程度上取決于RNA的質(zhì)量。利用提取的RNA人們可以對特定的基因表達(dá)進(jìn)行定量的檢測，從分子水平的了解細(xì)胞生命活動的規(guī)律。通常一個典型的哺乳動物細(xì)胞約含有10-5μgRNA ，其中80%～85%為rRNA（主要是28S、18 S和5.8 S、5S四種類型）；10%～15%為tRNA和核內(nèi)小分子RNA。

這些高峰度的RNA的大小和序列確定，可通過凝膠電泳、密度梯度離心、陰離子交換層析和高壓液相層析（HPLC）分離。相反，占RNA總量1%～5%的為mRNA 。mRNA 雖然大小和核苷酸序列各不相同，從數(shù)百至數(shù)千堿基不等，但大多數(shù)真核細(xì)胞mRNA在其3"端均有一寡聚腺苷酸(polyA)組成的尾，其長度一般足以吸附于寡聚脫氧胸苷酸—纖維素