精子活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑盒產(chǎn)品說明書

【資料簡介】

主要用途

  精子活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑是一種旨在使用赫斯特33258和熒光素標記的花生凝集素雙重熒光染色技術(shù)，分析精子活力以及頂體狀態(tài)的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種動物或人體精子細胞以及凍存精子細胞的檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡便，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

在男科學（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子壽命、以及生育能力的基礎(chǔ)信息。其中精子的活力（vitality）、運動能力（motility）、授精潛力（fertilizing potential）、膜結(jié)構(gòu)或染色質(zhì)結(jié)構(gòu)完整性（integrity）、頂體反應(yīng)（acrosomal reaction）功能的評價是精子分析的重要指標，也是決定人工受孕或體外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要參數(shù)。其中頂體反應(yīng)，是指當精子接近卵子實施授精時，精子頭部前半端的帽狀結(jié)構(gòu)頂體，釋放出溶解酶，以便精子和卵子的膜融合。頂體反應(yīng)測試是一項穩(wěn)定的精子功能參數(shù)，可以用于預(yù)測受精成功率。因此頂體的結(jié)構(gòu)完整性（intact）是評價的主要標志，也是不育癥和避孕藥物研究的對象。使用DNA敏感性熒光染料赫斯特33258（Hoechst 33258）和熒光素標記的花生凝集素（Isothiocyano-fluoresceinated peanut Arachis hypogaea agglutinin；PNA-FITC）雙重熒光染色技術(shù)，是精子活力，以及精子頭部頂體狀態(tài)分析和授精效率評價的zui常用的方法。首先使用赫斯特33258染色，分析精子活力，基于赫斯特33258具有有限的膜通透性特點，受到活體精子細胞（包括游動性和非游動性精子）的排斥，而容易進入死亡精子細胞。其次使用熒光素標記的花生凝集素染料，與頂體外膜糖蛋白上的半乳糖殘基（β-D-galactosyl residue）的結(jié)合，顯示完整性（未反應(yīng)性unreacted）頂體，同時可以應(yīng)用于受精時的精卵反應(yīng)。雙染的作用，以幫助區(qū)分生理性反應(yīng)性頂體缺失（loss）或病理性退行性頂體缺失。通過常用的熒光顯微鏡（激發(fā)波長488nm，散發(fā)波長530nm）便可清晰觀察到綠色頂體狀態(tài)（status）。