ELISA試劑盒應用中有替代前者的趨勢

【資料簡介】

    CA724試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA試劑盒）.已知CA724濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將CA724和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中CA724的濃度呈比例關系。ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)系統(system)的略語。親和素是一種糖蛋白，分子量60000，每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成。生物素為小分子化合物，分子量244。

    用化學方法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子形成生物素標記產物，標記方法頗為簡便。生物素與親和素的結合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反應大得多，兩者一經結合就極為穩定。由于一個親和素可與4個生物素分子結合，因此如把ABS與ELISA試劑盒法可分為酶標記親和素-生物素(LAB)法和橋聯親和素-生物素(ABC)法兩種類型。兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統中的酶標抗體(抗原)。

    在LAB中，固相生物素先與不標記的親和素反應，然后再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度。在早期，親和素從蛋清中提取，這種卵親和素為堿性糖蛋白，與聚苯乙烯載體的吸附性很強，用于ELISA中可使本底增高。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點，由于ABS-ELISA較普通ELISA試劑盒多用了兩種試劑，增加了操作步驟，在臨床檢驗中ABS-ELISA應用不多。1．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，

不可保存。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻ELISA試劑盒里的各種成份及樣品。
6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．按照說明書中標明的時間、ELISA試劑盒加液的量及順序進行溫育操作。