B16鼠黑色素瘤細胞培養(yǎng)的經(jīng)驗

【資料簡介】

16鼠黑色素瘤細胞。好像這株細胞還有亞型的，不過中科院說不清，我也就說不清了。總之是B16。

細胞總的來說比較好養(yǎng)，操作基本都是常規(guī)的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培養(yǎng)，一段時間為了省錢用過新生牛也不錯。但是傳代多了，細胞有形態(tài)改變。可以棄掉重新復(fù)蘇。血清國產(chǎn)的杭州四季青，感覺不滅活比滅活要好養(yǎng)一些。

傳代操作，主要是無菌操作。細胞增殖快非常好養(yǎng)，但是及時換液，否則也很容易死亡、或變形。消化用0.25%，可以用含EDTA的，效率更高一點。

消化步驟：棄血清——用D-hank's洗一遍，兩管就夠——加——鏡下觀察邊晃動——細胞開始變形即可——棄，不含EDTA者直接加含血清培養(yǎng)基也可——按次序吹打每個角落2-3遍——鏡下看成單細胞懸液（否則再吹）——棄去大部分（留1/4—1/8即可）——加適量培養(yǎng)基——繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：不提倡據(jù)經(jīng)驗按消化時間來估計是否消化*。不同情況下細胞的消化時間不同，比如：的活力、的溫度、是否含EDTA、細胞的活力、細胞的密度等等。