毛霉*

【資料簡介】

毛霉操作前打開紫外燈30-60分鐘，這個大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果，但紫外消毒期間建議不要進(jìn)去一次特意打開抽濾裝置，可以與紫外燈一起打開，毛霉此時不需要抽濾開的過大就可以。（所謂的抽濾裝置就是就是那個風(fēng)機(jī)，就是吹風(fēng)超凈工作臺，不是過濾培養(yǎng)液的）!

細(xì)胞傳代培養(yǎng)（消化法）具體操作：

一：傳代前準(zhǔn)備；

1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。

6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：毛霉取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，*消化溫度是37℃。

2. 毛霉 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。

三：吹打分散細(xì)胞；

1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

2.吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機(jī)中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

四：分裝稀釋細(xì)胞；

1.分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。zui后要做好標(biāo)記。

五：繼續(xù)培養(yǎng)；

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。毛霉傳代細(xì)胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25％時為一個＋，占50％為＋＋，占75％時為＋＋＋。  

XY1433    鮭魚胚胎細(xì)胞,RTG細(xì)胞

XY1434    鮭魚胚胎細(xì)胞,CHSE細(xì)胞

XY1435    光滑念珠菌

XY1436    光孢短柄帚霉

XY1437    骨髓瘤細(xì)胞株 U266細(xì)胞,

XY1438    骨髓瘤細(xì)胞,SP2/0細(xì)胞

XY1439    骨髓瘤細(xì)胞,P3X63Ag8細(xì)胞

XY1440    骨髓瘤細(xì)胞,P3X63Ag8.653細(xì)胞

XY1441    骨髓瘤細(xì)胞,P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細(xì)胞

XY1442    骨髓瘤細(xì)胞,FO細(xì)胞

XY1443    骨肉瘤細(xì)胞,U-2 OS細(xì)胞

XY1444    骨肉瘤細(xì)胞,SW1353細(xì)胞

XY1445    骨肉瘤細(xì)胞,MG-63細(xì)胞

XY1446    谷氨酸棒桿菌

XY1447    構(gòu)巢曲霉

XY1448    腎細(xì)胞隆突型 MDCK superdome細(xì)胞

XY1449   腎細(xì)胞,Super Tube細(xì)胞

XY1450    腎細(xì)胞,MDCK細(xì)胞,

XY1451    腎細(xì)胞,MDCK(NBL-2)細(xì)胞

XY1452    腎細(xì)胞,MDCK (NBL-2)細(xì)胞

XY1453    腎上皮細(xì)胞,MDCK-EGFP-puro細(xì)胞

XY1454    腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞,DH82細(xì)胞,

XY1455    垂體細(xì)胞

XY1456    宮頸癌細(xì)胞,HeLa細(xì)胞

XY1457    宮頸癌細(xì)胞,HeLa 229)細(xì)胞

XY1458    宮頸癌細(xì)胞,HCE1細(xì)胞

XY1459    根土壤桿菌（發(fā)根植物單胞菌）

XY1460    睪丸酮叢毛單胞菌

XY1461    睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞,MLTC-1細(xì)胞

XY1462    高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞,MHCC97-H細(xì)胞,

XY1463    高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞,LM3細(xì)胞

XY1464    高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞,HO-8910PM細(xì)胞

XY1465    高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,95-D細(xì)胞

XY1466    肝細(xì)胞,HL-7702細(xì)胞

XY1467    肝卵圓細(xì)胞,HOC細(xì)胞