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雞腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)試劑盒使用說明書

2014年07月02日 08:17:55人氣:502來源:上海滬宇生物科技有限公司

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關 鍵 詞雞腦脊髓炎病毒抗體
【資料簡介】

 

使用目的:

本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)表達。 

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中雞腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值) ,與CUTOFF值相比較,從而判定標本中雞腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)的存在與否。

試劑盒組成  

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

酶標試劑  6ml×1瓶  8  陽性對照  0.5ml×1 瓶

酶標包被板  12 孔×8條  9  陰性對照  0.5ml×1 瓶

樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份

顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張   

顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

標本要求  

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。    

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。  

7. 溫育:操作同3。 8.  洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

計算和結(jié)果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)陰性

陽性判定:樣品OD 值≥  臨界值(CUT OFF)者為腦脊髓炎病毒抗體(AEV Ab)陽性 。  

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存: ;2-8℃。

2.有效期:6個月 

上海滬宇生物科技有限公司作者

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