蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒使用說(shuō)明書

【資料簡(jiǎn)介】

蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒

一、蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒簡(jiǎn)介：

蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)染色，簡(jiǎn)稱HE染色，是病理學(xué)常規(guī)制片中zui基本的染色方法，應(yīng)用機(jī)器廣泛。蘇木精是從原產(chǎn)中南美的洋蘇木中提取出來(lái)的淺黃褐色的結(jié)晶，是一種堿性染色劑，它在被氧化后生成蘇木素，同媒染劑(常用的是三價(jià)的鋁或鹽鐵)一起使用，能夠使細(xì)胞核染色。在病理診斷、教學(xué)和科研工作中，常用HE染色對(duì)正常組織和病變組織進(jìn)行形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察。對(duì)于確定或鑒別病變組織、細(xì)胞中出現(xiàn)的某些異常物質(zhì)與特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶組織化學(xué)方法、免疫組織化學(xué)方法等也均是在觀察HE染色組織切片的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。在HE染色的組織切片中，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿呈紅色，二者形成鮮明的對(duì)比，易于觀察分析。

森貝伽生物蘇木素伊紅染色試劑盒中，*采用進(jìn)口的高純度蘇木精、硫酸鋁鉀、甘you等組成，不含氧化gong、甲醇等有害物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞核染色效果好。其特點(diǎn)：長(zhǎng)期保存，不易產(chǎn)生沉淀和金屬;應(yīng)用范圍廣，可以用于人、動(dòng)物、畜牧、水產(chǎn)等領(lǐng)域，可以用于組織石蠟切片、冰凍切片和組織細(xì)胞的染色等；*可以重復(fù)使用。

 

二、蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒染色原理：

1、細(xì)胞核染色的原理：

蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。2、細(xì)胞漿染色的原理：

伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7～5.0)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。3、分化作用：

染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過(guò)多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。4、返藍(lán)作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過(guò)程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

 

三、蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒組成：

試劑(A):改良Lillie-Mayer*100ml500mlRT避光

試劑(B):伊紅染色液100ml500mlRT避光

 

四、蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒成分：

試劑(A):主要由蘇木素、甘you等組成。試劑(B):主要由伊紅、防腐劑、氧化劑等組成。

自備材料：

1、1%酸性乙醇分化液,亦可采購(gòu)酸性乙醇分化液

2、弱堿性水，亦可采購(gòu)氨水溶液(0.1%)

3、*水溶液,亦可采購(gòu)*水溶液(1%)

4、無(wú)水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇等系列乙醇

5、4%的多聚甲醛，亦可采購(gòu)多聚*(4%PFA)

 

五、操作步驟（僅供參考）：

石蠟切片染色

1、切片脫蠟至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。

②（可選）無(wú)水乙醇作用2次，每次3～5min。

③95%的乙醇3～5min

④90%的乙醇3～5min

⑤80%的乙醇3～5min

⑥自來(lái)水或蒸餾水沖洗1～3min

2、染色

①改良Lillie-Mayer*染色5～8min

②自來(lái)水或蒸餾水沖洗5～10s

③1%酸性乙醇分化（可以省略）2～5s

④自來(lái)水沖洗20～30s

⑤弱堿性水(如0.2%氨水或1%*)返藍(lán)20～40s

⑥自來(lái)水沖洗30～60s

⑦伊紅染色液染色3～5min

⑧自來(lái)水沖洗1～5s2、脫水、透明、封固

80%乙醇10～20s

②90%乙醇10～20s

③95%乙醇作用2次，每次1～2min。

④無(wú)水乙醇作用2次，每次2～3min。

⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。

⑥中性樹脂封片。

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。

（二）冰凍切片染色

1、乙mi-乙醇混合固定液5～10s

2、自來(lái)水沖洗2～5s

3、改良Lillie-Mayer*滴染1～2min(可加熱至50℃)。

4、自來(lái)水沖洗2～5s

5、1%的酸性乙醇分化液（可選）2～5s

6、自來(lái)水沖洗2～5s

7、弱堿性水(如0.2%氨水或1%*)返藍(lán)2～5s

8、自來(lái)水沖洗5～10s

9、伊紅染色液染色2～5s

10、水洗1～2s

11、80%的乙醇1～2s

12、95%的乙醇1～2s

13、無(wú)水乙醇2～5s

14、*二甲苯（1:3）2～5s

15、二甲苯透明3次，每次2～5s。

16、中性樹脂封片

六、備選方案：

1、無(wú)需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗2～3min.

2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。（三）細(xì)胞染色

1、4%的多聚甲醛固定10～20min。2、自來(lái)水沖洗2次，每次2min。3、蒸餾水沖洗2次，每次2min。

4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

七、注意事項(xiàng)：

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。

2、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。

3、1%的酸性乙醇分化液的分化時(shí)間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和1%的鹽酸乙醇分

化液的新舊而定，另外分化后自來(lái)水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠，以便*清洗酸。

4、乙mi-乙醇混合固定液是由乙mi和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，密閉保存。5、冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。

6、促藍(lán)液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促藍(lán)液或0.1～1%*水溶液。7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

八、有效期：12個(gè)月有效。