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黃曲霉毒素B1間接競爭酶免疫分析
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上 傳 人 | 南京森貝伽生物科技有限公司 | 需要積分 | 0 |
關 鍵 詞 | 黃曲霉毒素B1 |
- 【資料簡介】
利用本實驗室融合的抗AFB1雜交瘤細胞株,通過4次克隆成功篩選出3株穩定分泌抗AFB1單克隆抗體的細胞株。采用間接ELISA方法對3株細胞株進行亞類和特異性鑒定,選擇10D12細胞株進行單克隆抗體的大量制備。辛酸飽和硫酸銨法結合HiTrap Protein G HP親和柱純化后的單克隆抗體亞類主要為IgG1,親和常數為2.85×1010L/mol,屬于高親和力抗體。SDS-PAGE電泳結果表明純化后的單克隆抗體純度較高,無雜蛋白。間接ELISA方法測定濃度為0.5mg/mL的純化單克隆抗體的效價為1:16000,滿足本試驗的要求。采用魯米諾-對碘*-過氧化氫增強化學發光體系進行黃曲霉毒素B1間接競爭化學發光酶免疫分析方法的建立。魯米諾、對碘*、過氧化氫濃度均為1mM時的檢測效果。
通過對影響反應靈敏度的各參數的優化,成功建立了AFB1間接競爭化學發光酶免疫分析方法。所建方法的直線回歸方程為Logit(Y)=1.5602-4.1389log(X),IC50為2.4314μg/L,檢出限為0.09μg/L,擬合曲線的線性范圍為0.31μg/L20μg/L。與進口ELISA試劑盒的檢測結果具有較好的相關性,表明所建方法可成功用于實際樣品的檢測。使用相同抗原和抗體建立的黃曲霉毒素B1間接競爭ELISA方法的檢測限為0.56μg/L,線性范圍為0.6310μg/L。所建ELISA方法與AFG1的交叉反應率為14.765%,與其它參試毒素的交叉反應率均小于3%,表明具有較好的特異性。所建立的間接競爭化學發光酶免疫分析方法與間接競爭ELISA方法相比,靈敏度提高了6倍,同時線性范圍也寬于ELISA方法。初步組裝的化學發光酶免疫分析試劑盒和ELISA試劑盒均可在4度保存3個月以上。
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