一步法快速檢測三聚氰胺試劑盒（條）說明書

【資料簡介】

Ⅰ  新產(chǎn)品名稱，目錄編號及內(nèi)容物

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	內(nèi)容物
新產(chǎn)品研發(fā)銷售單位：     上海銳聰公司 （Lanhao Bio-phama. Co. Ltd.） 美國哥倫比亞生物公司 （Columbia Bio LCC.） 新產(chǎn)品負(fù)責(zé)人： 王進(jìn)輝 通訊地址：   上海市閘北區(qū)共和新路1010號（佳和商務(wù)大廈）801室 郵政編碼： 200070 ： 傳真： 現(xiàn)場用一步法三聚氰胺定性快速檢測試劑盒（試紙條）	10條/包
實驗室用一步法三聚氰胺定量快速檢測的試劑盒（ELISA）	96孔盤的檢測量

 

Ⅱ  新產(chǎn)品描述

應(yīng)市場需求，我公司與美國哥倫比亞生物公司合作，并以美國哥倫比亞生物公司發(fā)明的一步法快速免疫檢測技術(shù)平臺為基礎(chǔ)開發(fā)生產(chǎn)兩種*的快速而簡易的一步法三聚氰胺快速檢測試劑產(chǎn)品，該產(chǎn)品以20分鐘的一次性反應(yīng)取代耗時與繁瑣的常規(guī)步驟（其整個過程一般需7至24小時多達(dá)10個步驟：抗體包埋 （2～12小時），封閉（2～3小時），樣品結(jié)合 （1～2小時），洗滌（5～15 分鐘），*抗體結(jié)合（2～3 小時），洗滌（5～15 分鐘），第二抗體結(jié)合（1～2小時），洗滌（5～15 分鐘），顯色（5～20 分鐘），讀盤（1分鐘）），從而使得檢測過程簡單化和快速化。使用現(xiàn)場用一步法三聚氰胺定性快速檢測試劑盒的用戶無需設(shè)備和專業(yè)技能就可進(jìn)行檢測；而使用實驗室用一步法三聚氰胺定量快速檢測試劑盒的用戶即可進(jìn)行無需設(shè)備的初步定量檢測，也可使用簡單的ELISA讀盤機(jī)進(jìn)行簡單的專業(yè)技術(shù)檢測。

 

Ⅲ  應(yīng)用

• 現(xiàn)場一步法三聚氰胺定性快速檢測試紙條主要用于：

現(xiàn)場定性檢測三聚氰胺，無需設(shè)備，例如牛奶現(xiàn)場檢測，家庭用戶檢測奶制品及飼料是否含有三聚氰胺等。

• 實驗室用一步法三聚氰胺定量ELISA快速檢測試劑盒主要用于：

定量檢測三聚氰胺的含量，可使用設(shè)備或不使用設(shè)備均可進(jìn)行定量檢測，而這區(qū)別僅在于定量的精度不同，非常方便技術(shù)監(jiān)督、檢驗檢疫部門進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量檢測，對于沒有設(shè)備的區(qū)縣級監(jiān)督檢驗機(jī)構(gòu)可運(yùn)用無需設(shè)備的初步定量檢測。

 

Ⅳ  特點：

⑴簡便：簡單的一步法反應(yīng)  （常規(guī)方法需6步以上：抗體包埋，封閉，樣品結(jié)合，洗滌，*抗體結(jié)合，洗滌，第二抗體結(jié)合，洗滌，顯色，讀盤）；

⑵快速：樣品檢測時間為20分鐘左右；

⑶準(zhǔn)確：檢測準(zhǔn)確，檢測限—快速檢測試劑條<2 mg/kg （L）, ELISA試劑盒小于0.1 mg/kg （L）,   重現(xiàn)性好；

⑷方便：一步法三聚氰胺定量快速檢測ELISA試劑盒用戶，初步定量檢測無需設(shè)備就可進(jìn)行檢測；

⑸價廉：本一步法產(chǎn)品費(fèi)用低廉。

 

Ⅴ  貯藏

試劑盒里的各種試劑可貯存于（2-8 °C）冷藏柜，于盒上標(biāo)注日期前用完。

 

Ⅵ試驗設(shè)計

1.檢測原理

本試劑盒采用免疫競爭法檢測三聚氰胺。微量反應(yīng)板上包被有抗三聚氰胺抗體。反應(yīng)后，加入三聚氰胺酶結(jié)合物和三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離三聚氰胺與三聚氰胺酶結(jié)合物競爭微量反應(yīng)板上的抗三聚氰胺抗體，沒有結(jié)合的酶結(jié)合物被洗去。再向反應(yīng)孔中加入相應(yīng)反應(yīng)底物，作用一定時間后，結(jié)合的酶結(jié)合物將底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，讀取各孔OD值。就可計算出樣品中的三聚氰胺濃度。

2.提供的試劑

⑴ 用鋁箔袋真空包裝的96孔板 （12×8條），內(nèi)含指示干燥劑

⑵ 濃度分別為 0µg/L, 20µg/L, 50µg/L, 100µg/L,200µg/L, 500 µg/L 的5瓶三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液

⑶ 1瓶 稀釋液

⑷ 1 瓶 三聚氰胺HRP酶標(biāo)記物.

⑸ 1 瓶 底物.

⑹ 1 瓶 停止液.  （注意! 1N 鹽酸. 勿接觸皮膚.）

3.額外所需物品（未包含在該試劑盒中）

⑴ 帶450 nm濾光片的酶標(biāo)儀（根據(jù)檢測精度要求可選擇是否使用），計時器

⑵ 20 mM PBS： 0.62g NaH₂PO₄-2H₂O+5.73gNa₂HPO₄-12H₂O+9gNaCl  蒸餾水定容至1000ml

4. 樣品預(yù)處理

• 固體樣品

⑴ 潮飼料的提取方法：稀釋系數(shù)：100

① 用攪拌機(jī)均質(zhì)樣品直至呈糊狀

② 用10 mL 60% MeOH/水萃取2 g樣品并劇烈渦旋振蕩

③ 超聲裂解樣品1 min

④ 再次渦旋振蕩樣品1 min。靜置5 min使其分層

⑤ 10000 rpm離心10min

⑥ 用G6玻璃濾紙過濾清澈的上層相，然后用干凈的瓶子儲存提取液

⑦ 用樣品稀釋液將清澈的提取液稀釋20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

⑧ 此稀釋的樣品可直接用于試驗

回收率介于75-117%

⑵ 干飼料的提取方法：稀釋系數(shù)：200

① 用攪拌機(jī)均質(zhì)干貓糧樣品

② 稱取1 g均質(zhì)樣品，加10 mL 60% 甲醇/水

③ 劇烈渦旋振蕩后超聲裂解樣品1min。再次振蕩1min后靜置5min

④ 10000 rpm離心10min

⑤ 用G6玻璃濾紙過濾清澈的上層相，然后用干凈的瓶子儲存提取液

⑥ 用樣品稀釋液將清澈的提取液稀釋20倍（0.1mL+1.9 mL 10%MeOH/20mM PBS）

⑦ 此稀釋的樣品可直接用于試驗

• 液體樣品

① 取液體樣品，用稀釋液稀釋，根據(jù)液體樣品的不同隨產(chǎn)品提供相應(yīng)稀釋濃度的說明。

5.步驟（注意: 標(biāo)準(zhǔn)及樣品做平行試驗以增加準(zhǔn)確度.）

⑴ 將所有試劑及樣品置于室溫下，用實驗室級的水充滿洗瓶

⑵ 從鋁箔袋中取出相應(yīng)數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮

⑶ 吸取100ul標(biāo)樣或稀釋的樣品提取液到相應(yīng)的微孔。每個樣品使用一個新的吸頭。每孔加50ul三聚氰胺HRP酶標(biāo)記物

⑷ 輕輕混合30秒，孵育30分鐘

⑸ 孵育完后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用洗液*充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)三次，總共洗板四次

⑹ 在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干

⑺ 每孔加入100ul底物溶液

⑻ 孵育20分鐘

⑼ 每孔加入100ul終止液

⑽ 用酶標(biāo)儀讀取450nm下的吸光值