牛支原體ELISA試劑盒說明書操作步驟解析

【資料簡介】

 牛支原體ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。
                                                                     48T/96T
 
使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中牛支原體表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛支原體表達。用純化的牛支原體抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中牛支原體相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的牛支原體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中牛支原體的存在與否。
牛支原體ELISA試劑盒組成

1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標試劑 3ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×4條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.         編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
 
 
2.         加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
 
計算和結果判定：
  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為牛支原體陰性
 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為牛支原體陽性
。
牛支原體ELISA試劑盒注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
牛支原體ELISA試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月