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牛支原體ELISA試劑盒說明書操作步驟解析

2013年06月02日 20:37:13人氣:365來源:卡邁舒(上海)生物科技有限公司

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關 鍵 詞牛支原體ELISA試劑盒,牛布病ELISA試劑盒,牛流行熱ELISA試劑盒
【資料簡介】

 牛支原體ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。
                                                                     48T/96T
 
使用目的:
本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中牛支原體表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛支原體表達。用純化的牛支原體抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中牛支原體相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的牛支原體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中牛支原體的存在與否。
牛支原體ELISA試劑盒組成

1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標試劑 3ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×4條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個


標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.         編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
 
 
2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
 
計算和結果判定:
  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
 臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為牛支原體陰性
 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為牛支原體陽性

牛支原體ELISA試劑盒注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
牛支原體ELISA試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

卡邁舒(上海)生物科技有限公司作者

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