ELISA試劑操作中容易出現的問題

【資料簡介】

問題	可能原因	防止方法
（一） 顯色淡 靈敏度偏低	1．試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高	試劑盒置保溫箱內運輸，并放足夠數量的冰塊，盡量縮短運輸時間
	2．試劑盒超過有效期	超過效期試劑盒不要使用
	3．試劑、樣品用前未能平衡	用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右
	4．試劑開啟時間過長長菌	試劑開啟后請盡量在短時間內用完
	5．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸頭內壁掛液太多或內壁不清潔	校正移液器，吸頭要配套，每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快，排放應*。吸頭內壁要清潔，一次性使用。
	6．恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃）	放入反應板時注意培養箱溫度，及時調整，孵育反應期間開啟不宜太多，影響溫度平衡。
	7．孵育反應時間不足	定時鐘準確定時
	8．洗滌時沖擊力太大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數增加	減少洗滌沖擊力，按說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數
	9．顯色劑滴加量不足或順序顛倒，或混合后加入	滴加顯色液時，滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，反加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入
	10．顯色劑反應時間不足	準確定時
	11．蒸餾水水質有問題	測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響
	12．樣品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反應	樣品不能加 NaN 3 防腐
（二） 重復性差	1．對于定量產品，沒帶標準品、質控品，采用以前的標準線	每次試驗都必須帶標準品、質控品
	2．樣品數量多少不一，加樣時間有長有短	重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近
	3．樣本加入后未混勻	加樣后在混勻器上充分混勻
	4．移液器加樣量不一致	盡可能使用同一移液器和裝緊吸頭移液時用力及抽吸速度一致
	5．酶標儀濾光片不對或輸入波長不對	TMB顯色用450或450/630nm雙波長
	6．酶標儀測定重復性差	校準酶標儀
	7．操作過程個別孔液體外濺	穩拿穩放，防止外濺
	8．不同批號試劑盒中組分混淆	不同批號試劑，不能混用
	9．瓶蓋相互交叉使用	不同組分瓶蓋間不能交叉使用
	10．獻血員冒名頂替	嚴格管理獻血員
	11．保溫時間不一致	重復測定標本，反應條件、人員等盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成不一致的可能性，計時應以*滴 TMB的B液加入開始計時
	12．洗滌條件不一致
	13．顯色條件時間不一致
	14．操作人員不一致
	15．洗滌不正確	用洗液注滿各孔，但不要溢出。甩板時反應板面向下，垂直用力甩凈內容物（可多甩幾次），在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應有堵孔，洗滌應充分
	16．溫育條件不一致（一次用水浴，一次用恒溫箱）	恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.10-0.15,均采用恒溫箱，沒有恒溫箱者，水浴鍋的水溫應控制在37℃
	17．唾液或其它雜物掉入孔內	用記號筆直圈上，便于分析
	18．不慎加酶或底物液于孔壁上，有殘留	用吸水紙吸干壁上殘留的酶或底物液
	19．不慎多加或少加酶或顯色劑B	多加時顯色深，少加則淺，用記號筆圈上，便于分析
	20．閾值附近時陰時陽	重復做奇數次，以偶數次結果為準
	21．標本離心處理不全，致使檢測時于反應板孔內發生凝血現象或殘留細胞成分干擾	血清或血漿應充分離心處理， 3000rpm6分鐘以上