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細胞培養過程污染有哪些?

2013年05月13日 14:10:05人氣:594來源:南京森貝伽生物科技有限公司

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關 鍵 詞細胞培養過程污染有哪些,細胞培養過程有哪些污染
【資料簡介】

人為操作污染
空氣:操作凈化工作臺,工作不帶口罩,外界氣流過強,溫度大,含菌 消毒:殘留污物
操作:馬虎不準確,觀念不強
血清:檢測不嚴,支原體和病毒
組織:原代組織有污染,手術中污染,本身是污染組織(潰爛的腫瘤,碘酒消毒后,擦試不凈。可能混入污染)
細胞培養污染對細胞的影響
污染時間短、輕,及時排除,細胞可能恢復,細胞變粗糙,細胞輪廓增強。?
輕:細胞生長緩慢、分裂相;
重:停止增殖,分裂相消失,胞質中出現大量堆積物,細胞變圓,崩潰并從瓶壁脫落。
微生物的污染
(1)支原體:無致死毒性,可與細胞長期共存,對細胞影響潛在。
(2)霉菌
(3)細菌:增殖快,短時間在數量上壓過細胞產生毒素殺死細胞。
(4)病毒
(5)真菌:種類繁多,形態各異,呈白色或淺黃色小點,飄浮于培養液面,肉眼可見。 鏡下:呈絲狀或管狀、樹枝狀絲,縱橫交錯穿行于細胞間。
(6)支原體:介于細菌與病毒之間,能獨立生活的zui小微生物無細胞壁,形態多樣,0.2um,可通過濾器圓形絲狀或梨形,在光鏡下很難看清結構。 對*普遍有抗藥性。
細胞受到支原體污染后出現以下情況:
嚴重:細胞增殖緩慢,部分細胞變圓,從瓶壁脫落。 輕:無明顯變化,或有微細變化由于傳代和換液而緩解觀察不夠細心或缺乏經驗,檢查不出。
支原體檢測:
相差:油浸下觀察,暗色微小顆粒,有類似布朗運動,分布細胞表面和細胞之間。
值注:支原體與線粒體相似,需加以區別支原體染色Carnoy固定。 低張處理地依紅:地依紅 2g冰醋酸 60ml加水至 100ml染色 15 分鐘脫水封固。
光鏡:支原體為暗紫色小體,附細胞外或散在細胞之間。 Hoechst33258:為DNA特異結合的熒光探針,支原體DNA能被著色,是檢測支原體zui方便、有效的一種方法。
染色 10 分鐘,漂洗后觀察。?醋酸:甲醇(1:3)固定,33258(50 g/ml) 工具:微孔濾膜:能濾除支原體在內的粒子,處理受支原體污染的培養液或血清,但不能去掉附于細胞表面的支原體。 藥物:溴*(Bromouracil)支原體的DNA也攝取溴*,用光照射,通過光敏效應殺滅支原體。

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