細胞培養過程污染有哪些?

【資料簡介】

人為操作污染
空氣：操作凈化工作臺，工作不帶口罩，外界氣流過強,溫度大，含菌 消毒：殘留污物
操作：馬虎不準確，觀念不強
血清：檢測不嚴，支原體和病毒
組織：原代組織有污染，手術中污染，本身是污染組織（潰爛的腫瘤，碘酒消毒后，擦試不凈。可能混入污染）
細胞培養污染對細胞的影響
污染時間短、輕，及時排除，細胞可能恢復，細胞變粗糙，細胞輪廓增強。?
輕：細胞生長緩慢、分裂相；
重：停止增殖，分裂相消失，胞質中出現大量堆積物，細胞變圓，崩潰并從瓶壁脫落。
微生物的污染
（1）支原體：無致死毒性，可與細胞長期共存，對細胞影響潛在。
（2）霉菌
（3）細菌：增殖快，短時間在數量上壓過細胞產生毒素殺死細胞。
（4）病毒
（5）真菌：種類繁多，形態各異，呈白色或淺黃色小點，飄浮于培養液面，肉眼可見。 鏡下：呈絲狀或管狀、樹枝狀絲，縱橫交錯穿行于細胞間。
（6）支原體：介于細菌與病毒之間，能獨立生活的zui小微生物無細胞壁，形態多樣，0.2um，可通過濾器圓形絲狀或梨形，在光鏡下很難看清結構。 對*普遍有抗藥性。
細胞受到支原體污染后出現以下情況：
嚴重：細胞增殖緩慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。 輕：無明顯變化，或有微細變化由于傳代和換液而緩解觀察不夠細心或缺乏經驗，檢查不出。
支原體檢測：
相差：油浸下觀察，暗色微小顆粒，有類似布朗運動，分布細胞表面和細胞之間。
值注：支原體與線粒體相似，需加以區別支原體染色Carnoy固定。 低張處理地依紅：地依紅 2g冰醋酸 60ml加水至 100ml染色 15 分鐘脫水封固。
光鏡：支原體為暗紫色小體,附細胞外或散在細胞之間。 Hoechst33258：為DNA特異結合的熒光探針，支原體DNA能被著色，是檢測支原體zui方便、有效的一種方法。
染色 10 分鐘，漂洗后觀察。?醋酸:甲醇（1:3）固定，33258（50 g/ml） 工具：微孔濾膜：能濾除支原體在內的粒子，處理受支原體污染的培養液或血清，但不能去掉附于細胞表面的支原體。 藥物：溴*（Bromouracil）支原體的DNA也攝取溴*，用光照射，通過光敏效應殺滅支原體。

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