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犬組織多肽抗原(TPA)ELISA kit操作說明

2013年03月15日 11:34:33人氣:817來源:上海裕平生物科技有限公司

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關 鍵 詞上海裕平生物,酶聯免疫試劑盒,48T/96T,進口
【資料簡介】

犬組織多肽抗原(TPA)定量檢測試劑盒(ELISA

使用說明書

                                                                                                                            

【試劑盒名稱】

犬組織多肽抗原(TPA)定量檢測試劑盒(ELISA

【試劑盒用途】

定量檢測犬血清、血漿及相關液體樣本中組織多肽抗原TPA)的含量。

 


上海裕平生物科技公司高品質ELISA試劑盒供應商,品質,價格實惠,售后完善,并提供免費代檢測服務。
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【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被犬組織多肽抗原TPA)單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物AB,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中犬組織多肽抗原(TPA)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中犬組織多肽抗原(TPA)含量。

備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:160804020105U/L

 

【需要而未提供的試劑和器材】

137恒溫箱

2、標準規格酶標儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6、吸水紙

【操作步驟】

1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

7、溫育:重復4的操作。

8、洗板:重復5的操作。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL37℃避光顯色15min

10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。

11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。


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