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熒光素標(biāo)記腫瘤抑素抗體IgG相關(guān)知識

2013年02月28日 16:19:57人氣:296來源:上海安研商貿(mào)有限公司

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【資料簡介】

熒光素標(biāo)記腫瘤抑素抗體IgG相關(guān)知識

 

1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。

  2
、細(xì)胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。

  3
、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-*-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-*-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤*磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

  4
、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化 HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞,只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法,篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞,并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后,及時進(jìn)行凍存。

  5
、單克隆抗體的大量制備 單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

 
1)體內(nèi)誘生法 Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。

 
2)體外培養(yǎng)法 將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來,各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),大大提高了抗體的生產(chǎn)量。

 

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