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熒光素標記血管粘附蛋白1抗體IgG,Anti-VAP1/FITC

2013年02月28日 14:31:06人氣:252來源:上海安研商貿有限公司

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關 鍵 詞熒光素標記血管粘附蛋白1抗體IgG,Anti-VAP1/FITC,熒光素標記血管粘附蛋白1抗體IgG
【資料簡介】

熒光素標記血管粘附蛋白1抗體IgG,Anti-VAP1/FITC

Anti-VAP1/FITC  熒光素標記血管粘附蛋白1抗體IgG
anti-VASH1/FITC  熒光素標記兔抗血管抑制蛋白1抗體IgG
Anti-VAT/FITC  熒光素標記囊泡乙酰*通道抗體IgG
Anti-USP1/FITC  熒光素標記泛素特異性蛋白酶1抗體IgG
Anti-VCAM-1/FITC(CD106)  熒光素標記血管內皮細胞粘附分子抗體IgG
Anti-VCAM-1/CD106 /FITC  熒光素標記血管內皮細胞粘附分子抗體IgG
Anti-Vcan/FITC  熒光素標記蛋白聚糖Versican抗體IgG
Anti-V.cholera Ogawa/FITC  熒光素標記01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG
ANti-V5 tag/FITC  熒光素標記V5 tag標簽抗體IgG
Anti-V5 tag/HRP  辣根過氧化物酶標記V5 tag標簽抗體IgG
Anti-V.cholera Ogawa/FITC  熒光素標記01群小川型霍亂弧菌抗體IgG
Anti-VCP/p97 /FITC  熒光素標記抗含纈酪肽蛋白抗體IgG
Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG
Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群小川型霍亂弧菌抗體IgG
Anti-Influenza A Virus H1/HRP  辣根過氧化物酶標記羊抗季節性A型流感病毒H1抗體IgG
Anti-Influenza A Virus H3/HRP  辣根過氧化物酶標記羊抗季節性流感病毒H3抗體IgG

蛋白質樣品獲得:細菌誘導表達后,可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞,真核細胞加勻漿緩沖液,機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后413,000g離心15min。取上清液作為樣品。(二)電泳:制備電泳凝膠,進行SDS-PAGE

轉移:(半干式轉移)
1
、電泳結束后將膠條割至合適大小,用轉膜緩沖液平衡,5min×3次。
2
、膜處理:預先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜,浸入轉膜緩沖液中10min
3
、轉膜:轉膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好,濾紙、凝膠、NC膜對齊,每一步去除氣泡,上壓 500g重物,將碳板上多余的液體吸干。接通電源,恒流1mA/cm2,轉移1.5hr。轉移結束后,斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標準的條帶染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脫色,至背景清晰,然后用雙蒸水洗,風干夾于兩層濾紙中保存,留與顯色結果作對比。

免疫反應:
1
、用0.01M PBS洗膜,5min ×3次。
2
、加入包被液,平穩搖動,室溫2hr
3
、棄包被液,用0.01M PBS洗膜,5min×3次。
4
、加入一抗(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋,液體必須覆蓋膜的全部),4 放置12hr以上。陰性對照,以1%BSA取代一抗,其余步驟與實驗組相同。
5
、棄一抗和1%BSA,用0.01M PBS分別洗膜,5min×4次。
6
、加入辣根過氧化物酶偶聯的二抗(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋),平穩搖動,室溫2hr
7
、棄二抗,用0.01M PBS洗膜,5min×4次。
8
、加入顯色液,避光顯色至出現條帶時放入雙蒸水中終止反應。
四、注意事項
1
、一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經過預實驗確定*條件。
2
、顯色液必須新鮮配置使用,zui后加入H2O2
3
DAB有致癌的潛在可能,操作時要小心仔細

上海安研商貿有限公司作者

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