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人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞
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- 【資料簡介】
1. 血清必須貯存于–20 ~ -70 oC,若存放于4 oC,請勿超過一個月。如果一次無法用完一 瓶,可將40~45 ml 分裝于無菌50 ml 離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10 %, 必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。
2. 一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加 入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。
3. 瓶裝(500ml) 血清解凍步驟(逐步解凍法): -20 oC 或–70 oC 至4 oC 冰箱溶解一天,至室 溫下全溶后再分裝,一般以50 ml 無菌離心管可分裝40~45 ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20 oC 直接 至37 oC 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。
4. heat-inactivation 是指56 oC, 30 分鐘加熱已*解凍之血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補體成份(complement) 去活化。除非必須,一般不建 議作此熱處理,因為會造成沈淀物之顯著增多,且會影響血清之品質(zhì)。補體參與之反應(yīng)有: cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells and plaets, enhanced phagocytosis, chemotaxis andactivation of lymphocytic and macrophage cell type。
5. 勿將血清置于37 oC 太久,若在37 oC 放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。
6. 血清之沈淀物
6.1. 凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性 及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本 身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000 rpm, 5 min 去除,或離心后上 清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。
6.2. 顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。 有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認(rèn)為血清遭受污染,而將血清放在37 oC 中欲培養(yǎng)此“微生物“,但在37 oC 環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認(rèn)為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此 小黑點應(yīng)不會影響細(xì)胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批 號的血清。
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