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人胃腺癌細胞
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- 【資料簡介】
人胃腺癌細胞配制培養基之生長測試
4.1. 材料:
4.1.1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
4.1.2. 6-well TC plate (or 35 mm TC dish)
4.1.3. methanol
4.1.4. glacial acetic acid
4.1.5. 10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)
4.2. 步驟:
4.2.1. 以待測試培養基培養MDCK cell,接種MDCK 細胞于6-well plate (或35 mm TC dish) 中,每個well 接種1 × 102 活細胞,同時作對照組實驗。
4.2.2. 接種5~7 天后,在100 倍倒立顯微鏡作觀察細胞群落之生長,待細胞群 落大到可以肉眼觀察,而群落間不互相接觸時即可。
4.2.3. 去除培養基,加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇:冰醋酸﹦ 3:1),室溫下靜置10 min。
4.2.4. 去除固定液,水洗二次。
4.2.5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution,,室溫下靜置染色2-3 min。
4.2.6. 去除染液,水洗二次。
4.2.7. 以肉眼計數群落數,并比較之,若新配制或新批號的培養基對細胞生長不佳,則丟棄之。
抗生素
1. 細胞庫之細胞培養基不加抗生素
1.1. 培養自ATCC 引進之細胞株,培養基中不加抗生素。
1.2. 培養自其它實驗室引進之細胞株,制作token freeze 前培養基須添加抗生素,待 token freeze 通過污染測試后,大量培養時則不加抗生素。
2. 寄送活細胞時,須將培養液充滿整個flask 時,則須添加抗生素(penicillin 100 units/ml + streptomycin 100 ug/ml)。
3. 若要檢測mycoplasma,則培養基內不可添加gentamicin,因gentamicin 會抑制mycoplasma 生長。
4. 去除細菌污染之抗生素混合配方: penicillin 250 units/ml, streptomycin 250 ug/ml, neomycin 250 ug/ml, bacitracin 2.5 units/ml,注意混合使用后藥物毒性會增強。
5. 抗生素使用種類與濃度:
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