SUPER Green I-核酸電泳用試劑

【資料簡介】

SUPER Green I核酸染料特點(diǎn)

● 無毒性：屬花箐類染料，容易生物降解，無致癌毒性。

            ● 靈敏度高：至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25～100倍。

            ● 信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。

            ● 操作簡單：無須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察。

            ● 適用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠 

               電泳和毛細(xì)管電泳等。

            ● 使用方便：對(duì)分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq 酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑 

               制作用。

            ● 經(jīng)濟(jì)：價(jià)格比銀染便宜。

SUPER Green I使用方法簡介

1．膠染法（用法同EB）（推薦方法，見圖1）

（1） 制膠時(shí)加入SUPER Green I 核酸染料。冷卻膠至50℃左右，每100mL膠中加入3～5μL

SUPER Green I 核酸染料。

（2） 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳即可。

u       注：此方法染色可以準(zhǔn)確確定核酸片段分子量，染料用量相對(duì)較少。1mL染料大約可以做300塊 100mL的膠。

2．點(diǎn)染法 （見圖3）

（1） 該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

（2） 工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SUPER Green I 稀釋100倍，即為SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置2～8℃保存一個(gè)月以上。

（3） 制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

（4） 樣品染色：向分析樣品中加入SUPER Green I 工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SUPER Green I 與樣品中DNA充分結(jié)合。SUPER Green I 工作液加入量為總上樣量的1/5～1/10。

（5） DNA Marker染色：將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μLSUPER Green I 工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SUPER Green I 與DNA充分結(jié)合。

（6） 上樣、電泳：按常規(guī)操作。

u       注：用點(diǎn)染法染色時(shí)，靈敏度zui高，染料用量zui少。但大片段稍有滯后現(xiàn)象，如果需要更準(zhǔn)確確定分子量（與Marker對(duì)比），建議使用膠染法。

3．泡染法

（1） 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

（2） 用pH 7.0～8.5 的緩沖液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000﹕1的比例稀釋SUPER Green I 濃縮液，混勻，制成染色溶液。

（3） 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10～30分鐘，染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上，讓稀釋液均勻地覆蓋整個(gè)膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

u       注：用泡染法染色時(shí)，可以確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中zui多的。

4.  點(diǎn)染＋膠染法（見圖2）

此法結(jié)合方法1和方法2，靈敏度zui高，對(duì)于低濃度樣本比EB檢測更靈敏。

幾種染色方法特點(diǎn)比較

特點(diǎn) 染色方法	靈敏度	染料用量	確定片段分子量度
膠染法（推薦方法）	較高	較少	較高
點(diǎn)染法	很高	zui少	大片段稍有滯后
泡染法	較高	zui多	zui高
點(diǎn)染＋膠染法	zui高	較多	大片段稍有滯后

SUPER Green I使用注意事項(xiàng)

（1） 在SUPER Green I點(diǎn)染法中，電泳時(shí)間不要超過2小時(shí)，否則SUPER Green I會(huì)從DNA上分離出來，會(huì)產(chǎn)生彌散狀條帶。

（2） 用點(diǎn)染方法染色時(shí)，條帶稍有滯后現(xiàn)象，如果需要確定片段分子量（與Marker對(duì)比），建議使用膠染法（方法1）。

（3） 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，SUPER Green I可以全部從雙鏈核酸上去掉。

（4） 如果想對(duì)用 SUPER Green I 染過的膠進(jìn)行 Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%～0.3% 的SDS。

（5） 在紫外照射透視下，與雙鏈 DNA 接合的 SUPER Green I呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。

（6） SUPER Green I對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。