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牛偽狂犬病毒(PRV)定性檢測(cè)試劑盒(ELISA)

2012年06月07日 11:04:19人氣:502來(lái)源:上??ㄅ锟萍加邢薰?/span>

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【資料簡(jiǎn)介】

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

 

牛偽狂犬病毒(PRV)定性檢測(cè)試劑盒(ELISA

使用說(shuō)明書(shū)

                                                                                                                            

【試劑盒名稱(chēng)】

牛偽狂犬病毒(PRV)定性檢測(cè)試劑盒(ELISA

 

【試劑盒用途】

定性檢測(cè)牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中偽狂犬病毒(PRV)。

 

【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、待測(cè)樣本和酶標(biāo)工作液加入到預(yù)先包被牛偽狂犬病毒(PRV)抗體的透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入顯色劑AB液,顯色劑(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中牛偽狂犬病毒(PRV)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和樣品的OD值,判斷樣本中是否含有牛偽狂犬病毒(PRV)。

 

【試劑盒組成】

1

酶標(biāo)包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

陰性對(duì)照

0.6mL

8

顯色劑B

6mL

3

陽(yáng)性對(duì)照

0.6mL

9

終止液

6mL

4

20倍濃縮洗滌液

25mL

10

說(shuō)明書(shū)

1

5

樣本稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標(biāo)試劑

10mL

12

密封袋

1個(gè)

 

【需要而未提供的試劑和器材】

137恒溫箱

2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6、吸水紙

 

 

【操作步驟】

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加對(duì)照品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在對(duì)照品孔中加入陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品各50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍);每孔再加入酶標(biāo)工作液100μL;空白對(duì)照孔不加。

4、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。

6、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL37避光顯色15min

7、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。

 

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

 

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

5、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。

7、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

 

【結(jié)果判斷】

1 試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00

                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

2 臨界值(Cut off)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3 陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

4 陽(yáng)性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽(yáng)性

 

【操作程序總結(jié)】

 

準(zhǔn)備試劑,樣品和對(duì)照品

 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品、對(duì)照品品和酶標(biāo)工作液,37反應(yīng)60分鐘

 

洗板5次,加入顯色液A、B37顯色15分鐘

 

加入終止液

 

15分鐘之內(nèi)讀OD

 

計(jì)算

【規(guī)格】

96人份/

【貯藏】

2-8,避光防潮保存。

【有效期】

6個(gè)月

 

 

 

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