人乙肝（HBV）elisa試劑盒樣品處理及操作步驟

【資料簡(jiǎn)介】

                       人乙肝(HBV)elisa試劑盒樣品處理及操作步驟

樣品收集、處理及保存方法

1、 血  清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)

胞迅速小心地分離。

2、 血  漿----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)，1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液--1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿--－將組織加入適量鹽水搗碎，1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保  存----如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-80 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血，如果

血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾，不要在37℃或更高的溫度加熱解凍，應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔，每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使

用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標(biāo)記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩

混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次，如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加

一次。

5． 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次，如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加

一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

9． 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。