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人(Human)白介素4(IL-4)ELISA

2011年09月20日 10:35:11人氣:630來源:上?ㄅ锟萍加邢薰

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【資料簡介】

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷

人(Human)白介素4IL-4ELISA

檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙蛋白兩步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預包被捕獲蛋白的透明微孔中,依次加入標準品、標本,溫育并洗滌后,再加入HRP標記的檢測蛋白,溫育并洗滌后,用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測蛋白濃度呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.     酶標儀(450nm

2.     高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正,F象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

2.  標準品臨使用時再稀釋,稀釋后用剩的標準品應立刻丟棄,不可保存。

3.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8

12孔×4

標準品

0.6mL

0.6mL

按說明書進行稀釋

*

6mL

3mL

標準品稀釋液

6mL

3mL

檢測蛋白-HRP

6mL

3mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

試劑的準備

1.  標準品:標準品(1600pg/mL)在實驗前用標準品稀釋液進行倍比稀釋,得到6個濃度點(包括標準品點):1600、800、400、200、100、50pg/mL

2.  20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板4-5次。

2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板4-5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條密封放回4℃。

2.  除空白孔外,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍),用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min

3.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

4.  除空白孔外,每孔加入檢測蛋白-HRP 50μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5.  重復步驟3的操作。

6.  每孔加入底物A、B50μL,輕輕振蕩混勻,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

1.  每個標準品和樣本的OD值應減去空白孔的OD值。

2.  繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值,再乘以稀釋倍數,即為樣本濃度。

試劑盒性能

1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于6號標準品。

3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

 

 

上海卡努生物科技有限公司作者

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