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正常人羊膜細胞(HAM)原代細胞培養
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- 【資料簡介】
實驗材料:
1. 人胎盤;
2. PBSA/GASP:含抗生素的PBSA(*,50μg/ml;*,1.25μg/ml;*100μg/ml;*100U/ml);
3. 丙三醇;
4. 含50%丙三醇的DMEM;
5. */EDTA;
6. Millicell微孔膜組織培養插片;
7. 塑料刮片和無菌棉拭子;實驗方法:
1. 用PBSA/GASP清洗組織;
2. 分離人羊膜,用戴手套的手從胎盤上將羊膜鈍性分離下來,分離出的羊膜薄層包括上皮細胞,基底膜和一些基質組織;
3. 用無菌棉拭子除去基底膜下的基質組織,使分離的羊膜盡可能的??;
4. 在監測供者血清以除外疾病的時期,可以將粗分離出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放;
5. 臨用前解凍人羊膜,用PBSA清洗后將其切成直徑約為2mm的小塊;
6. 用*/EDTA消化組織塊,37℃,30min;
7. 用塑料刮片輕刮消化過的人羊膜,除去上皮細胞,注意不要破壞基底膜;
8. 用PBSA清洗裸露的羊膜,并將它的基底膜面(去除上皮細胞的面)黏附在Millicell微孔膜組織培養插片上;
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