88国产精品视频一区二区三区,久久精品AⅤ无码中文字字幕重口,久久偷看各类WC女厕嘘嘘,好男人资源在线看免费的

技術(shù)中心

實驗技術(shù):細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)

2011年05月11日 11:09:42人氣:329來源:上海酶聯(lián)生物研究所

資料類型文件資料大小0
下載次數(shù)0資料圖片 【點(diǎn)擊查看】
上 傳 人上海酶聯(lián)生物研究所 需要積分0
關(guān) 鍵 詞實驗技術(shù):細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)
暫無上傳相關(guān)文件
【資料簡介】

www.dgxuda.com/st32881/product_690947實驗技術(shù):細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)

一、操作規(guī)程:

1.實驗前,無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射30-60分鐘滅菌,70%酒精擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可開始實驗操作.每次操作只處理一株細(xì)胞,以免造成細(xì)胞交叉污染.實驗結(jié)束后,將實驗物品帶出工作臺。如需要繼續(xù)進(jìn)行下一個實驗,則用70%酒精擦拭無菌操作臺面,再讓無菌操作臺風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可進(jìn)行下一個實驗操作。

2.無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔與寬敞,必要物品,如試管架,移液器或吸管頭等可以暫時放置,其它實驗用品用完后應(yīng)及時移出,以利氣體流通.實驗用品要用70%酒精擦拭后才能帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在操作臺*無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。

3.小心取出無菌實驗用品,避免造成污染。切勿碰觸吸管與吸頭頭部或容器瓶口,不要在打開的容器正上方操作實驗。容器打開后,用手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放在臺面上。

4.工作人員應(yīng)注意自身的安全,必須穿戴實驗衣與手套后才進(jìn)行實驗。對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺至少兩級。操作過程中,應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑,例如DMSOTPA,并避免尖銳物品傷人等。

5.定期檢查下列項目:CO2鋼瓶內(nèi)的CO2壓力;CO2培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2濃度,溫度,及水盤是否有污染;無菌操作臺內(nèi)氣流壓力是否正常,定期更換紫外燈管及HEPA過濾器濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000/HEPA)

二、粉末細(xì)胞培養(yǎng)基的配制1 為例

細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10%血清,因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900 mlpH 7.2 - 7.4NaHCO3另外添加,若將NaHCO3 粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會造成 pH 之誤差,或局部過堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3 粉末應(yīng)分別溶解后才混合,然后用CO2 氣體調(diào)整pH,而非用強(qiáng)酸(HCl)或強(qiáng)堿(NaOH),因為氯離子對細(xì)胞生長可能有影響,且貯存時培養(yǎng)基的pH 易發(fā)生改變。

【試劑與設(shè)備】

1. 純水(milli-Q 水或二次至三次蒸餾水,水品質(zhì)非常重要

2. 粉末培養(yǎng)基 (1640DMEM等)

3. NaHCO3 (Sigma S-4019)

4. 電磁攪拌器

5. 無菌血清瓶

6. 0.22 微米無菌過濾膜

7. pH meter

8. 真空瓣

9. CO2 氣體

【配制步驟】

1. 取粉末培養(yǎng)基溶于700 ml milli-Q 水中,攪拌使其溶解。

2. 稱取適量之NaHCO3粉末數(shù)量依培養(yǎng)基種類而異溶于200ml milli-Q 水中,攪拌使其溶解,然后通入CO2氣體至飽和,約3-5 分鐘。

3. 將溶解且含飽和CO2 NaHCO3 溶液加入溶解之液體培養(yǎng)基中混合。混后溶液之pH 應(yīng)為7.2-7.4,除非pH 值偏差太大,否則不需用酸堿再調(diào)整之。若為太堿,可再通入CO2 氣體調(diào)整pH。培養(yǎng)基以真空幫助通過過濾膜時,pH 會升高0.1-0.2

4. 0.1 0.2 mm 無菌過濾膜過濾滅菌,同時分裝至無菌容器中,標(biāo)示培養(yǎng)基種類、日期、瓶號等,貯存于4血清亦可加入培養(yǎng)基中一起過濾

5. 配制之培養(yǎng)基配制須作生長試驗與污染測試。

【注意事項】

1. 液體培養(yǎng)基貯存于4 冰箱,避免光照,實驗進(jìn)行前放在37水槽中溫?zé)帷?span lang="EN-US">

2. 液體培養(yǎng)基加血清存放期為六個月,期間glutamine 可能會分解,若細(xì)胞生長不佳,可以再添加適量glutamine

上海酶聯(lián)生物研究所作者

上一篇:Amersham

下一篇:APTSIC


我要投稿
  • 投稿請發(fā)送郵件至:(郵件標(biāo)題請備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯(lián)系電話0571-87759680
環(huán)保行業(yè)“互聯(lián)網(wǎng)+”服務(wù)平臺
環(huán)保在線APP

功能豐富 實時交流

環(huán)保在線小程序

訂閱獲取更多服務(wù)

微信公眾號

關(guān)注我們

抖音

環(huán)保在線網(wǎng)

抖音號:hbzhan

打開抖音 搜索頁掃一掃

視頻號

環(huán)保在線

公眾號:環(huán)保在線

打開微信掃碼關(guān)注視頻號

快手

環(huán)保在線

快手ID:2537047074

打開快手 掃一掃關(guān)注
意見反饋