人抗鼠抗體（HAMA）ELISA試劑盒說明書

【資料簡介】

使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗鼠抗體(HAMA)表達。

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人抗鼠抗體(HAMA)表達。用純化的人抗鼠抗體(HAMA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中抗鼠抗體(HAMA)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗鼠抗體(HAMA)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人抗鼠抗體(HAMA)的存在與否。

操作步驟
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。