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豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab)試劑盒使用說明

2017年06月14日 08:35:15人氣:357來源:上海滬宇生物科技有限公司

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關 鍵 詞豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab)試劑盒,豬,elisa試劑盒,試劑盒
【資料簡介】

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                          96T

20 U/L -500 U/L

 

使用目的:

本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗夾心法測定標本豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab)水平。用純化的抗包被微孔板,制成固相抗,往包被單抗的微孔中依次加入流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab),再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab)濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(960 U/L)

0.5ml×1瓶

3

標包被

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

480 U/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

240 U/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

120 U/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

60 U/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

30 U/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外

7、溫育:操作同3。

8、洗滌:操作同5。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

11、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

上海滬宇生物科技有限公司作者

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