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細(xì)胞爬片HE染色方法

時間:2013-10-29閱讀:996
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一、實(shí)驗原理:

蘇木素(Hematoxylin)-伊紅(Eosin)染色法,簡稱HE染色法。

HE染色法采用兩種染料即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅分別于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)發(fā)生作用,使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通過顏色而改變它的折光率,從而在光鏡下能清晰地呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像。該染色過程既有化學(xué)反應(yīng),又有物理作用參與。從化學(xué)反應(yīng)看,組織細(xì)胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì),細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子結(jié)合,而細(xì)胞核的堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子結(jié)合,使其中酸性細(xì)胞核被堿性的蘇木素染成藍(lán)色,而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。其結(jié)果胞核呈藍(lán)色,胞漿呈紅色。從物理現(xiàn)象看,主要有吸附、吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色,是細(xì)胞化學(xué)染色zui常用的一種方法。

二、實(shí)驗用品:

(1)固定液:常用95%乙醇和冰丙酮

(2)蘇木精染液:稱取蘇木精粉0.5g,銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入干油30ml和冰醋酸2ml,混合均勻,濾紙過濾,備用。

(3)伊紅染液:稱取0.5g水溶性伊紅染液,溶于100ml蒸餾水中。

(4)*乙醇溶液:用75%乙醇配制1%鹽酸。

(5)系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。

(6)培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、*、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。

三、實(shí)驗步驟:

(1)樣品制備:對于貼壁生長細(xì)胞,*消化,調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應(yīng)時間后,取出細(xì)胞爬片,用PBS洗滌3次。

(2)樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min。

(3)染核:蘇木素染液染色2-3min,自來水洗滌。

(4)分色:鏡下觀察,若細(xì)胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來水洗滌。

(5)染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌。 吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后,中性樹膠封片。 若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應(yīng)延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。

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