國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定中，存在眾多的干擾因素及影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷，這給實(shí)驗(yàn)者在一定程度上帶來(lái)了的困擾，今天小編在這里為大家分析下ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中內(nèi)源性的干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)等。在日常的臨床血清(漿)標(biāo)本中，有相當(dāng)比例不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì)，從而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的假陽(yáng)性。

類風(fēng)濕因子(rheumatoid factors,RF)在類風(fēng)濕患者、其他疾病以及正常人血清中,常含有較高或不同濃度的RF，RF一般為TgM型，亦有IgG和IgA型，RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn)，因?yàn)樵趀lisa測(cè)定中，其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的酶標(biāo)的特異抗體IgG結(jié)合，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。尤其是在捕獲法IgM型特異抗體的測(cè)定中表現(xiàn)zui為明顯，因?yàn)榇藭r(shí)固相包被的抗體為抗人弘鏈抗體，IgM型RF的存在可使其大量結(jié)合于固相。為避免RF對(duì)ELISA測(cè)定的干擾，通常可以采取下述措施：

、稀釋標(biāo)本：這在判斷急性病原體感染的特異IgM抗體如抗HAVIgM，抗HBclgM， TORCH的IgM抗體檢驗(yàn)等尤為有用。因?yàn)榧毙愿腥緯r(shí)，血循環(huán)中特異的IgM抗體滴度通常很高，而RF滴度通常相對(duì)要低得多。因此，在測(cè)定前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，特異的IgM因高滴度存在仍可檢出，而非特異的RF則會(huì)因?yàn)橄♂屪兂煞浅５偷牡味龋瑥亩鴮?duì)測(cè)定幾乎不產(chǎn)生干擾。現(xiàn)在，有些特異IgM檢測(cè)elisa試劑盒不要求稀釋標(biāo)本，直接檢測(cè)，這樣雖然方便了實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的操作，但容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，并且由于某些慢性感染，如HBV的感染，血循環(huán)中抗HBelgM可持續(xù)以一定的滴度存在，標(biāo)本不做稀釋即進(jìn)行檢測(cè)，即可出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，從而失去抗HBclgM用于HBV急性感染的診斷價(jià)值。因此，在臨床實(shí)驗(yàn)室，一定要使用要求對(duì)標(biāo)本做:000稀釋的試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)，從而保證相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果的可靠性及臨床應(yīng)用價(jià)值。

2、改變酶標(biāo)抗體：由于RF結(jié)合的是IgG的Fc片段，如果將待酶標(biāo)的抗體的F，片段酶切夫除，僅留下具有特異結(jié)合功能的F(ab’)2部分標(biāo)記酶，則在測(cè)定中即可避免RF的干擾。

3、標(biāo)本中RF用變性IgG預(yù)先封閉：將經(jīng)熱變性(63℃，0min)的動(dòng)物如兔、羊等的IgG加入到標(biāo)本稀釋液中，或是將該變性IgG連接至一顆粒固相如聚苯乙烯微球或微孔，然后加入臨床血清標(biāo)本，反應(yīng)后，再吸出標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。此外，在測(cè)定特異IgM時(shí)，也可使用抗人IgG去除臨床標(biāo)本中RF和IgG。

4、國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒測(cè)定抗原時(shí)，可在標(biāo)本中加入可使RF降解的還原劑：如2—巰基乙醇。2—巰基乙醇等還原劑可使抗體內(nèi)的巰基裂解，因而可以去除RF的干擾，但只適用于抗原測(cè)定。

5、包被或酶標(biāo)二抗使用特異的雞抗體IgY：RF不與雞IgY反應(yīng)，如果包被和酶標(biāo)二抗均為雞IgY抗體，則不受標(biāo)本中RF的干擾。
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)        20mg/支    英文名稱    075-2006    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    靛藍(lán)    20mg/支    英文名稱    076-20060    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)        20mg/支    英文名稱    077-200204    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    酯蟾毒配基    20mg/支    英文名稱    078-200507    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    麝香酮    20mg/支    英文名稱    079-20052    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)        20mg/支    英文名稱    072-2004    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    柚皮苷    20mg/支    英文名稱    0722-20060    規(guī)格:
含量測(cè)定    含量：    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    甘草次酸    20mg/支    英文名稱    0723-20062    規(guī)格:
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