人II型膠原（Collagen II）ELISA試劑盒原理

人II型膠原Collagen II原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 Collagen II 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 Collagen II與單抗結(jié)合，加入化的抗人Collagen II，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，Collagen II濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中Collagen II濃度。

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

. 收集標(biāo)本：人II型膠原Collagen II血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管7管，每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在*管中加入000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第六管中吸出300ul棄去。第七管為空白對(duì)照。加上原液管總共八管。

3. 0×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作:0倍稀釋（示例：ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水:20稀釋（示例：ml濃縮洗滌液加入9ml的重蒸水）

人II型膠原Collagen II檢測(cè)程序

. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品00ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

3. 每孔中加入*抗體工作液00ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液00ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液00ul，置37 ℃暗處反應(yīng)5分鐘。

8. 每孔加入00ul終止液混勻。

9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

人II型膠原Collagen II結(jié)果計(jì)算與判斷

. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品000、500、250、25、62.5、3.2、5.6、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)Collagen II含量。

試劑盒性能

. 靈敏度：zui小的Collagen II 檢測(cè)濃度小于8ng/ml。

2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人Collagen II。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于0％。

人II型膠原Collagen II注意事項(xiàng)

. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！