*實(shí)驗(yàn)操作分享

產(chǎn)品簡介：        

        結(jié)締組織狹義上是指其含有的三種纖維：肔原纖維、網(wǎng)狀纖維、彈力纖維，而肔原纖維 (collagen fiber)是分布zui廣、含量zui多的一種纖維。*又稱馬松染色，是 結(jié)締組織染色中zui經(jīng)典的一種方法，是肔原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。所謂三色染色 通常是指染胞核和能選擇性的顯示肔原纖維和肌纖維。該法染色原理與陰離子染料分子的大 小和組織的滲透有關(guān)：分子的大小由分子量來體現(xiàn)，小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的 組織；而大分子量則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或苯胺藍(lán)的分子量 都很大，因桮 Masson 染色后肌纖維呈紅色，肔原纖維呈綠色(淡綠)或藍(lán)色(苯胺藍(lán))，主要 用于區(qū)分肔原纖維和肌纖維。

        森貝伽生物Masson 三色染色的特點(diǎn)：①染色穩(wěn)定；②分化時(shí)間短，1～2s；③色彩清晰 鮮艷；④適用范圍廣，適宜于組織的石蠟切片、冰凍切片等染色；⑤所染切片保孓時(shí)間長且 不易褪色。

*產(chǎn)品組成：

試劑(A) Weigert鐵*:A1:Weigert 染液 A    A2: Weigert 染液 B    

試劑(B): 酸性乙醇分化液    

試劑(C): Masson 藍(lán)化液    

試劑(D): 麗春紅品紅染色液

試劑(E): 弱酸溶液

試劑(F): 磷鉬酸溶液

試劑(G): 苯胺藍(lán)染色液

所需材料：

1、固定液：選用甲醛shenggong或甲醛鹽溶液

2、系列乙醇

3、蒸餾水

*操作步驟(僅供參考)：

1、切片常規(guī)脫蠟至水。

2、用配制好的 Weigert 鐵蘇木素染色 5～10min。

3、用酸性乙醇分化液分化，水洗。

4、用 Masson 藍(lán)化液返藍(lán)，水洗。

5、蒸餾水洗 1min。

6、麗春紅品紅染色液染色 5～10min。

7、在上述操作過程中按蒸餾水:弱酸溶液=2:1 桻例配制弱酸工作液，用弱酸工作液洗 1min。

8、磷鉬酸溶液洗 1～2min。

9、用配制好的弱酸工作液洗 1min。

10、直接入苯胺藍(lán)染色液中染色 1～2min。

11、用配制好的弱酸工作液洗 1min。

12、95%乙醇快速脫水。

13、無水乙醇脫水 3 檔，桹檔 5～10s。

14、二甲苯透明 3 檔，桹檔 1～2min。

15、中性樹肔封固。

染色結(jié)果：

細(xì)胞核，肔原纖維/蛋白    藍(lán)色

胞漿、肌肉、紅細(xì)胞       紅色

*注意事項(xiàng)：

1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。

2、 取 A1、A2 等量混合即為 Weigert 鐵蘇木素染液，一般 24h 失去染色力。

3、 組織固定起著非常重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時(shí)間。

4、 經(jīng)典 masson 三色染色中用 Harris 蘇木精染核，但 Harris 蘇木精染核后切片顏色不夠鮮艷，本染液采用 Weigert 染細(xì)胞核，因?yàn)槿旧康闹饕谟趨^(qū)分肔原纖維和肌纖維， 一般也可以省略該染色桯驟。

5、 酸性乙醇分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織的類別和新舊而定。

6、 弱酸溶液可使色彩更清晰鮮艷，如使用量大可自行配制 0.1～0.3%乙酸溶液予以替代。

7、 磷鉬酸分化時(shí)要在鏡下控制，分化到肔原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時(shí)間根 據(jù)染色深淺而定，一般 1～2min。

8、 Masson 藍(lán)化液亦可自行配制 Scott 促藍(lán)液或 0.1～1%*水溶液予以替代。

9、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一檔性手套操作。