吖啶橙（AO）-EB 雙染色試劑盒說明書
原理及作用：
　　　細(xì)胞凋亡的檢測方法有形態(tài)學(xué)研究方法，生物化學(xué)研究方法，DNA 片段化檢測方法，以 及 TUNEL 等標(biāo)記片段化 DNA 方法，但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮，使用光 學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察是很重要的。
　　　細(xì)胞死亡的檢測方法有用熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，測定細(xì)胞代謝活性和形態(tài) 學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測定的，因而不一定反映實際情況。MTT 法是測定線粒體中*酶的活性，反映細(xì)胞數(shù)目的變化，其結(jié)果與細(xì)胞死亡的數(shù)目未必一致。 所以，有必要采用多種方法判斷細(xì)胞凋亡。
　　　吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色，與 DNA 單鏈或 RNA 結(jié)合時發(fā)橙色熒光。EB 嵌合 到 DNA 堿基對中間時發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過活細(xì)胞膜，EB 不能通過與活細(xì)胞膜具有相 同通透性的細(xì)胞膜。
試劑：100ug/ml 的吖啶橙溶液（PBS 溶解），100ug/ml 的 EB 溶液（PBS 溶解）。

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試劑盒組成

參考操作步驟

1、 每份樣品中加入試劑（A）及試劑（B）各 1ul，混合均勻；

2、 500g 離心細(xì)胞 5min；

3、 用 PBS 重懸細(xì)胞，將細(xì)胞密度調(diào)整為 5x105-5x106/ml；

4、 每 25ul 細(xì)胞懸液中加入試劑（A）和試劑（B）混合液；

5、 在潔凈的載玻片上加上 5ul 細(xì)胞懸液，蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡 B 域進(jìn)行觀察；

6、 顯綠色熒光的為活細(xì)胞，顯橙色熒光的為死細(xì)胞。

貯存

4℃,避光,4 個月

 注意事項

用能通過活細(xì)胞膜與 DNA 結(jié)合后發(fā)藍(lán)色熒光的 Hoechist 33342 和只能通過死細(xì)胞與 DNA 結(jié)合后發(fā)紅色熒光的碘化吡啶（ propidium iodide，PI）對細(xì)胞進(jìn)行二重染色的方法也比較 常用。