雞馬立克氏病病毒（MDV）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的： 本試劑盒用于檢測雞血清，血漿及相關液體樣本中馬立克氏病病毒（MDV）水平。

實驗原理 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中雞馬立克氏病病毒（MDV）。

用純化的馬立克氏病病毒（MDV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中馬立克氏 病病毒（MDV）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與 HRP 標記的馬立克氏 病病毒（MDV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中雞馬立克氏 病病毒（MDV）的存在與否。

試劑盒組成

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟

1.    編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.    加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸 及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.    溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.    溫育：操作同 3。

8.    洗滌：操作同 5。

9.    顯色：每孔先加入顯色劑 A 50µl，再加入顯色劑 B 50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色