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南京森貝伽生物科技有限公司

ELISA試劑盒的實驗注意事項

時間:2012-11-26閱讀:613
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1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8保存。標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、*標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。

洗板方法
手工洗板方法:吸去不可觸及板壁或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

以標準物的濃度為橫坐標對數坐標OD值為縱坐標普通坐標,在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。

5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數。

6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

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