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大鼠*釋放激素

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大鼠*釋放激素(GnRH)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用       
目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中*釋放激素(GnRH)的含量。
實驗原理:
   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠*釋放激素(GnRH)水平。用純化的大鼠*釋放激素(GnRH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入*釋放激素(GnRH),再與HRP標記的*釋放激素(GnRH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的*釋放激素(GnRH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中(GnRH)濃度。
操作步驟:
1.    標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L, 20ng/L ,10ng/L,5ng/L,2.5ng/L。
2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.    配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.    溫育:操作同3。
8.    洗滌:操作同5。
9.    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10.    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

 

 

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