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抗體
生物試劑
細胞
菌株
血清
細胞分離試劑
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鹽析法純化免疫球蛋白

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(一) 原理

蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度是由蛋白質(zhì)周圍親水基團與水形成水化膜的程度,以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。當用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液,中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質(zhì),于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時,中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后,由于離子強度發(fā)生改變,蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和,更加導致蛋白溶解度降低,使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。

(二) 主要材料

1. 試劑:

(1) 正常人混合血清;滅菌生理鹽水。

(2) 飽和硫酸銨溶液的配制:稱(NH42SO4(AR)400~425克,以50~80℃之蒸餾水500ml溶解,攪拌20分鐘,趁熱過濾。冷卻后以濃氨水(15N NH4OH)調(diào)PH至7.4。配制好的飽和硫酸銨,瓶底應有結晶析出。

(3) 萘氏試劑配制: 稱HgI 11.5克,KI8克,加蒸餾水至50ml,攪拌溶解后,再加入20%NaOH 50ml。

(4) 0.02M,PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液(Phosphate Buffered Saline PBS)配制。 
   貯存液: 
  A液:0.2M Na2HPO4:Na2HPO4·12H2O 71.64克,加蒸餾水至1000ml; 
  B液:0.2M NaH2P4:NaH2P4·2H2O 3.12克,加蒸餾水至1000ml;
  應用液:取A液81ml加B液19ml混合,再以生理鹽水作10倍稀釋即成。

(5) 0.1M,PH7.4磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer PB)配制:
  將上述A液取81ml與B液19ml混合,再以蒸餾水對倍稀釋即成。

(6) 20%磺基水楊酸。

2. 器材:

普通冰箱、離心機、電磁攪拌器、751桮型紫外分光光度計、扭力天平、粗天平。 
  透析袋、尼龍繩、細竹棒、精密PH試紙(PH5.5~9.0)、子、小剪刀。 
  燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。

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