人工制備營養(yǎng)充足的培養(yǎng)基并提供適宜的溫度、氣體、pH等培養(yǎng)條件,即能使細菌在體外環(huán)境迅速生長繁殖。細菌培養(yǎng)對臨床上病原菌的分離鑒定、制備抗生素、制備疫苗等生物制品都是*的。
一、培養(yǎng)基的制備原則:
1、必須有充足的營養(yǎng)。
2、合適的酸堿度。
3、無菌。
二、培養(yǎng)基的制備
培養(yǎng)基是用人工方法將多種營養(yǎng)物質(zhì)按照各類微生物生長的需要而合成的一種混合營養(yǎng)料。
常用的培養(yǎng)基有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基等。
按照培養(yǎng)基的物理性狀可分為液體,固體和半固體三類。
以下介紹常用基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備。
(一)肉湯培養(yǎng)基:
制法:稱取營養(yǎng)肉湯粉1.8g(含牛肉膏0.3克g,蛋白胨1g、氯化鈉0.5g)加入100ml蒸餾水中,用玻棒攪拌加熱溶解。按需要分裝于三角瓶或試管,瓶口或管口塞棉塞,包裝后置高壓蒸汽滅菌器內(nèi),在0.11Mpa(1.05公斤/厘米2)壓力下,溫度達1210C,維持15~20分鐘。冷卻后貼好標簽,40C冰箱貯存?zhèn)溆谩?nbsp;
制成后的肉湯呈淺黃色,清晰透明,pH 7.1+0.2
肉湯培養(yǎng)基常用于增菌培養(yǎng)。
(二)肉湯瓊脂固體培養(yǎng)基:
在上述肉湯培養(yǎng)基中加入2~3%瓊脂即成。經(jīng)高壓滅菌后,趁熱將試管斜置、冷凝,即成普通瓊脂斜面培養(yǎng)基;或趁熱取出后,稍冷,以無菌操作傾入滅菌的空培養(yǎng)皿,冷凝后即為普通瓊脂平板。制作瓊脂平板時,每一空皿(9厘米直徑)需培養(yǎng)基15~20ml。
普通瓊脂平板用于分離培養(yǎng)繁殖細菌;普通瓊脂斜面用于純培養(yǎng)和保存菌種。(瓊脂是從石花菜等海藻類中提取的多糖物質(zhì),當溫度達到98℃以上可溶化,45℃以下則凝固。瓊脂對細菌一般無營養(yǎng)作用,用做斜面、平板、高層等不同類型固體培養(yǎng)基的凝固劑。瓊脂通常呈酸性,加入液體培養(yǎng)基中可使酸堿度下降pH 0.2左右。)
(三)肉湯瓊脂半固體培養(yǎng)基:
在上述肉湯培養(yǎng)基中加入0.3~0.5%瓊脂,加熱溶化后,分裝于小試管(10×100mm),每管約3ml,高壓滅菌后直立冷凝即成。
半固體培養(yǎng)基用于檢查細菌的動力和細菌菌種的保存。
三、常用培養(yǎng)基介紹
(一)基礎(chǔ)培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有大多數(shù)細菌生長繁殖時所需要的氮源、碳源、無機鹽類、水份等zui基本的營養(yǎng)成份,可供大多數(shù)細菌生長,并可作為營養(yǎng)、鑒別及選擇培養(yǎng)基的基礎(chǔ)原料。常用的如肉湯培養(yǎng)基。
(二)營養(yǎng)培養(yǎng)基
在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一些其他的營養(yǎng)物質(zhì),如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等,可供培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高的細菌。例如血瓊脂平板、血清肉湯培養(yǎng)基等。
(三)鑒別培養(yǎng)基
利用各種細菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同,在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物,觀察細菌在其中生長后分解底物的作用,從而鑒別和鑒定細菌。例如,單糖發(fā)酵管就是在無糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(蛋白胨水)中加入某種糖類及指示劑,因不同細菌對各種糖類發(fā)酵作用不同而鑒別之。
(四)選擇培養(yǎng)基
在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),使之抑制某一類細菌生長,而有利于另一類細菌生長,從而將后者篩選出來,常用在含有雜菌的標本中分離某種致病菌,例如SS瓊脂平板。
(五)厭氧培養(yǎng)基(見實驗十-厭氧性細菌,P.80)
四、細菌的接種技術(shù)和培養(yǎng)方法:
一般細菌都可用人工方法進行培養(yǎng),以進一步研究它們的各種生物學(xué)特性。培養(yǎng)細菌時,根據(jù)研究目的和細菌生長條件的差異,需采用不同的接種技術(shù)和培養(yǎng)方法。
(一)細菌的接種技術(shù)
接種技術(shù)一般分為分離培養(yǎng)接種法和純種細菌接種法,正確的接種技術(shù)是獲得典型的生長良好的細菌培養(yǎng)物所必需的。