脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）是一類源自脂肪組織的多能干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化潛能。它們可以分化為多種細(xì)胞類型，包括脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等。ADSCs還具有低免疫原性、可塑性強(qiáng)、旁分泌多種生物活性因子等特性，使其在臨床應(yīng)用中具有廣闊的前景。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體（Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells Exosomes, ADSCs-Exos）是近年來(lái)再生醫(yī)學(xué)和組織修復(fù)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。ADSCs凋亡過(guò)程中釋放的細(xì)胞外囊泡（ApoEVs）在皮膚損傷修復(fù)中表現(xiàn)出色。該產(chǎn)品由脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)獲得的上清液，經(jīng)分離純化得到的外泌體，可用于實(shí)驗(yàn)對(duì)照、直接進(jìn)行負(fù)載和靶向改造、組織修復(fù)等研究。

產(chǎn)品性質(zhì)

儲(chǔ)存條件：-80 ℃，1年

1：NTA檢測(cè)外泌體的粒徑分布和顆粒濃度：

將得到的外泌體震蕩分散均勻，用PBS稀釋至合適倍數(shù)，標(biāo)記好樣本名稱、稀釋倍數(shù)、完成樣本的稀釋配制；測(cè)樣之前，先測(cè)試稀釋液：移液槍吸取200 μL稀釋液上機(jī)檢測(cè)，確認(rèn)組件、儀器都處于正常運(yùn)行；稀釋液測(cè)量完成，測(cè)試結(jié)果正常后開(kāi)始測(cè)試樣本，取稀釋后的200 μL樣本上機(jī)檢測(cè)；待計(jì)數(shù)顆粒數(shù)達(dá)到100個(gè)以上時(shí)停止測(cè)試，導(dǎo)出數(shù)據(jù)結(jié)果，完成樣本檢測(cè)。

2：TEM觀察外泌體的形態(tài)：

重懸外泌體至50-100 μL 2% PFA中，將5 μL混合懸液加到Formvar-carbon載樣銅網(wǎng)上；也可將5-10 μL混合懸液滴加到封口膜上，將銅網(wǎng)Formvar膜面朝下放在懸液上。每個(gè)樣品準(zhǔn)備2-3個(gè)銅網(wǎng)；將100 μL PBS加到封口膜上。用鑷子將銅網(wǎng) (Formvar膜面朝下) 放在PBS液滴上清洗（在所有步驟中，都應(yīng)保持Formvar膜面濕潤(rùn)，而另一面干燥）；將銅網(wǎng)放在50 μL 1%戊二醛液滴上5 min；將銅網(wǎng)放在100 μL ddH₂O洗滌8次，每次洗2 min；將銅網(wǎng)放在50 μL草酸雙氧鈾液滴上（pH 7.0），5 min；將銅網(wǎng)放在50甲基纖維素液滴上10 min，冰上操作；銅網(wǎng)放到樣品臺(tái)頂端的不銹鋼環(huán)上，用濾紙吸去多余液體；空氣中干燥5-10 min；將銅網(wǎng)放在樣品盒內(nèi)，80 kV下拍攝電鏡照片。

3：Western Blot檢測(cè)外泌體標(biāo)志物（三陽(yáng)一陰）：

將分離純化得到的外泌體加入裂解液裂解后吸取上清液，根據(jù)測(cè)定蛋白濃度稀釋樣本至合適濃度；裂解液加入4×LDS上樣緩沖液（B0007，Invitrogen），95 ℃煮5 min，待降至室溫后，瞬離；加樣：將15 μL樣本全部加到泳道中，并在樣本首尾加上marker；電泳：190 V，70 min；提qian10 min用甲醇活化PVDF膜；轉(zhuǎn)膜：轉(zhuǎn)膜液需要提前預(yù)冷，275 mA，70 min；封閉：配置1% BSA的TBST溶液，室溫封閉1 h；孵育一抗：4 ℃，搖床上過(guò)夜，抗體用1% BSA的TBST溶液稀釋；洗膜：1×TBST洗三次，10 min/次；孵育二抗：抗體用1% BSA的TBST溶液稀釋，室溫?fù)u床1 h；洗膜：1×TBST洗三次，10 min/次；曝光拍照。

注意事項(xiàng)

本品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。